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公开(公告)号：CN102725404B
公开(公告)日：2015-05-20
申请号：CN201180006731.1
申请日：2011-01-12
申请人： 内帕基因株式会社
IPC分类号： C12N15/00
摘要： 本文公开了一种通过电穿孔技术进行的外源基因转移方法，该方法可适用于多种动物细胞并且在存活率和基因转移效率方面得到极其显著提高。本文还公开了一种甚至在没有使用专用转移缓冲液的时候能够通过电穿孔技术以高存活率和基因转移效率引入外源基因的方法。还公开了：一种通过电穿孔技术进行的外源基因转移方法，其特征在于在特定条件下将第一电脉冲(强脉冲)和第二电脉冲(弱脉冲)连续施加于动物细胞，和显著提高存活率和基因转移效率；以及通过电穿孔技术进行的上述外源基因转移方法，其中可用于培养所述细胞的液体培养基被用作转移缓冲液。
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公开(公告)号：CN105593369B
公开(公告)日：2020-01-14
申请号：CN201480054593.8
申请日：2014-05-27
申请人： 内帕基因株式会社
IPC分类号： C12N15/877 , A01K67/027
摘要： 一个目的是开发一种技术，其能够仅仅通过非常简单的操作来利用可广泛应用于哺乳动物的技术，该技术不需要利用ES细胞，并且其包括通过靶向基因组上的特定序列来修饰特定基因(基于ZFN等的基因组编辑技术)。提供了有效地修饰哺乳动物的任意靶基因的技术，其包括：将具有完整透明带的原核阶段哺乳动物合子浸入含有一对具有特定序列的mRNA分子的溶液中，和通过在三个步骤中施加多个方波脉冲来执行电穿孔处理，其中在预定范围内调节第一个电脉冲的总电能。
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公开(公告)号：CN108778400A
公开(公告)日：2018-11-09
申请号：CN201780011616.0
申请日：2017-02-02
申请人： 公益财团法人东京都医学综合研究所 , 内帕基因株式会社
摘要： 本发明目的在于提供一种技术，其可稳定地提高外来物质导入效率，可在不依赖操作者的熟练度的情况下，通过迅速且简便的操作，进行体内(in vivo)法的电穿孔。本发明涉及一种电穿孔用电极，其具有多个电极针，其特征在于，具有包含第一极性电极针、电极针保持部、以及注射器保持部的结构，具有两根以上的第一极性电极针从所述电极针保持部的外壳支承体下部结构体的底面朝电穿孔对象物侧突出的结构，在所述外壳支承体下部结构体的底面具有与注射器保持部侧连通的注射针插入/插出孔，在与所述电极针保持部的电穿孔对象物侧相反一侧具有注射器保持部，所述注射器保持部为具有注射针插入/插出路径的结构，且所述注射针插入/插出路径至少一部分具备第二极性用通电部。
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公开(公告)号：CN106459858A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201480079212.1
申请日：2014-12-24
申请人： 内帕基因株式会社
摘要： 本发明的目的在于通过可效率良好地进行制造的规格来制造一种电穿孔装置，其为多级式电穿孔装置，可对应于对象物的阻抗的不同而将穿孔脉冲的电压在几十至几千伏特的广范围内进行切换调整，且可稳定地产生连续多次穿孔脉冲。本发明提供一种电穿孔用电脉冲发生器，其特征在于具有(A)n段的科克拉夫特-瓦耳顿电路、以及在前述电路的输出侧连接的(B)分支合流电路，该分支合流电路包含：(b1)在高电压模式时开关关闭、在低电压模式时开关开启的切换开关，以及在其输出侧所串联的(b2)m1个串联m2并联的电容器的电路。
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公开(公告)号：CN102725404A
公开(公告)日：2012-10-10
申请号：CN201180006731.1
申请日：2011-01-12
申请人： 内帕基因株式会社
摘要： 本文公开了一种通过电穿孔技术进行的外源基因转移方法，该方法可适用于多种动物细胞并且在存活率和基因转移效率方面得到极其显著提高。本文还公开了一种甚至在没有使用专用转移缓冲液的时候能够通过电穿孔技术以高存活率和基因转移效率引入外源基因的方法。还公开了一种通过电穿孔技术进行的外源基因转移方法，其特征在于在特定条件下将第一电脉冲(强脉冲)和第二电脉冲(弱脉冲)连续施加于动物细胞，和显著提高存活率和基因转移效率；以及通过电穿孔技术进行的上述外源基因转移方法，其中可用于培养所述细胞的液体培养基被用作转移缓冲液。
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公开(公告)号：CN108778400B
公开(公告)日：2022-02-25
申请号：CN201780011616.0
申请日：2017-02-02
申请人： 公益财团法人东京都医学综合研究所 , 内帕基因株式会社
摘要： 本发明目的在于提供一种技术，其可稳定地提高外来物质导入效率，可在不依赖操作者的熟练度的情况下，通过迅速且简便的操作，进行体内(in vivo)法的电穿孔。本发明涉及一种电穿孔用电极，其具有多个电极针，其特征在于，具有包含第一极性电极针、电极针保持部、以及注射器保持部的结构，具有两根以上的第一极性电极针从所述电极针保持部的外壳支承体下部结构体的底面朝电穿孔对象物侧突出的结构，在所述外壳支承体下部结构体的底面具有与注射器保持部侧连通的注射针插入/插出孔，在与所述电极针保持部的电穿孔对象物侧相反一侧具有注射器保持部，所述注射器保持部为具有注射针插入/插出路径的结构，且所述注射针插入/插出路径至少一部分具备第二极性用通电部。
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公开(公告)号：CN106459858B
公开(公告)日：2018-01-30
申请号：CN201480079212.1
申请日：2014-12-24
申请人： 内帕基因株式会社
摘要： 本发明的目的在于通过可效率良好地进行制造的规格来制造一种电穿孔装置，其为多级式电穿孔装置，可对应于对象物的阻抗的不同而将穿孔脉冲的电压在几十至几千伏特的广范围内进行切换调整，且可稳定地产生连续多次穿孔脉冲。本发明提供一种电穿孔用电脉冲发生器，其特征在于具有(A)n段的科克拉夫特‑瓦耳顿电路、以及在前述电路的输出侧连接的(B)分支合流电路，该分支合流电路包含：(b1)在高电压模式时开关关闭、在低电压模式时开关开启的切换开关，以及在其输出侧所串联的(b2)m1个串联m2并联的电容器的电路。
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公开(公告)号：CN105593369A
公开(公告)日：2016-05-18
申请号：CN201480054593.8
申请日：2014-05-27
申请人： 内帕基因株式会社
IPC分类号： C12N15/877 , A01K67/027
摘要： 一个目的是开发一种技术，其能够仅仅通过非常简单的操作来利用可广泛应用于哺乳动物的技术，该技术不需要利用ES细胞，并且其包括通过靶向基因组上的特定序列来修饰特定基因(基于ZFN等的基因组编辑技术)。提供了有效地修饰哺乳动物的任意靶基因的技术，其包括：将具有完整透明带的原核阶段哺乳动物合子浸入含有一对具有特定序列的mRNA分子的溶液中，和通过在三个步骤中施加多个方波脉冲来执行电穿孔处理，其中在预定范围内调节第一个电脉冲的总电能。
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