公开(公告)号：CN112553349A

公开(公告)日：2021-03-26

申请号：CN202110056027.2

申请日：2021-01-15

Applicant: 内蒙古农业大学

Inventor： 曹贵方 ,  杨光 ,  宋永利 ,  窦傲蕾 ,  马腾 ,  智达夫 ,  苏红 ,  刘默凝 ,  杨宏新 ,  霍雨佳 ,  李喜和 ,  何亭漪 ,  杨燕燕 ,  达来 ,  李秀男

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种呼伦贝尔短尾羊纯合子、杂合子的鉴定引物、探针、试剂盒，并提供了一种基于该引物及探针的鉴别呼伦贝尔短尾羊纯合子和杂合子的方法。所述方法包括如下步骤：(1)提取呼伦贝尔短尾羊血液基因组DNA并稀释；(2) 对步骤(1)获得的DNA进行taqman SNP荧光探针qPCR；（3）产物检测。通过taqman SNP荧光探针qPCR，能够快速分辨出呼伦贝尔短尾羊纯合子与杂合子。本发明作为呼伦贝尔短尾羊基因分型的手段之一，鉴定方法操作简便，重复性好，反应时间短，具有极高的灵敏性和特异性。

公开(公告)号：CN112251519A

公开(公告)日：2021-01-22

申请号：CN202011381246.X

申请日：2020-12-01

Applicant: 内蒙古农业大学

Inventor： 曹贵方 ,  杨光 ,  宋永利 ,  窦傲蕾 ,  马腾 ,  智达夫 ,  苏红 ,  刘默凝 ,  杨宏新 ,  霍雨佳 ,  李喜和 ,  何亭漪 ,  杨燕燕 ,  达来 ,  李秀男

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种鉴定呼伦贝尔短尾羊纯合子、杂合子的特异性引物、探针及试剂盒，并提供了一种基于非标记探针高分辨率熔解曲线的呼伦贝尔短尾羊群体中纯合子、杂合子个体的鉴定方法。通过设计的非标记探针放大了纯合子和杂合子之间熔解曲线Tm值信号差异，取代传统测序，作为呼伦贝尔短尾羊基因分型的手段之一。本发明的鉴定方法操作简便，反应时间短，具有极高的灵敏性和特异性，可检测出呼伦贝尔羊群体中纯合子、杂合子个体。

公开(公告)号：CN112899375A

公开(公告)日：2021-06-04

申请号：CN202110356310.7

申请日：2021-04-01

Applicant: 内蒙古农业大学

Inventor： 曹贵方 ,  杨光 ,  宋永利 ,  窦傲蕾 ,  马腾 ,  智达夫 ,  苏红 ,  刘默凝 ,  杨宏新 ,  霍雨佳 ,  李喜和 ,  何亭漪 ,  杨燕燕 ,  达来 ,  李秀男

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/683 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明提供了一种鉴别呼伦贝尔短尾羊纯杂合个体的PCR‑RFLP方法及引物，利用Bci T130I限制性内切酶的特异性识别位点进行基因分型，以样本基因组DNA为模板，扩增呼伦贝尔短尾羊Brachyury/T基因，所扩增基因长度为203bp。上游引物所在Brachyury/T基因的95879504位点至95879486位点，下游引物位置为95879302位点至95879323位点；将PCR产物进行纯化后使用Bci T130I进行酶切；对酶切产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳观察结果，有着明显两条条带为纯合呼伦贝尔短尾羊，明显三条条带的为杂合呼伦贝尔短尾羊。本发明操作简便、反应不需要额外的分析步骤，并通过条带数量准确分型出纯、杂合基因型，酶切体系和时间不会引起Bci T130I酶的星活性。