公开(公告)号：CN112553349A

公开(公告)日：2021-03-26

申请号：CN202110056027.2

申请日：2021-01-15

Applicant: 内蒙古农业大学

Inventor： 曹贵方 ,  杨光 ,  宋永利 ,  窦傲蕾 ,  马腾 ,  智达夫 ,  苏红 ,  刘默凝 ,  杨宏新 ,  霍雨佳 ,  李喜和 ,  何亭漪 ,  杨燕燕 ,  达来 ,  李秀男

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种呼伦贝尔短尾羊纯合子、杂合子的鉴定引物、探针、试剂盒，并提供了一种基于该引物及探针的鉴别呼伦贝尔短尾羊纯合子和杂合子的方法。所述方法包括如下步骤：(1)提取呼伦贝尔短尾羊血液基因组DNA并稀释；(2) 对步骤(1)获得的DNA进行taqman SNP荧光探针qPCR；（3）产物检测。通过taqman SNP荧光探针qPCR，能够快速分辨出呼伦贝尔短尾羊纯合子与杂合子。本发明作为呼伦贝尔短尾羊基因分型的手段之一，鉴定方法操作简便，重复性好，反应时间短，具有极高的灵敏性和特异性。

公开(公告)号：CN112251519A

公开(公告)日：2021-01-22

申请号：CN202011381246.X

申请日：2020-12-01

Applicant: 内蒙古农业大学

Inventor： 曹贵方 ,  杨光 ,  宋永利 ,  窦傲蕾 ,  马腾 ,  智达夫 ,  苏红 ,  刘默凝 ,  杨宏新 ,  霍雨佳 ,  李喜和 ,  何亭漪 ,  杨燕燕 ,  达来 ,  李秀男

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种鉴定呼伦贝尔短尾羊纯合子、杂合子的特异性引物、探针及试剂盒，并提供了一种基于非标记探针高分辨率熔解曲线的呼伦贝尔短尾羊群体中纯合子、杂合子个体的鉴定方法。通过设计的非标记探针放大了纯合子和杂合子之间熔解曲线Tm值信号差异，取代传统测序，作为呼伦贝尔短尾羊基因分型的手段之一。本发明的鉴定方法操作简便，反应时间短，具有极高的灵敏性和特异性，可检测出呼伦贝尔羊群体中纯合子、杂合子个体。

公开(公告)号：CN115067320A

公开(公告)日：2022-09-20

申请号：CN202210770703.7

申请日：2022-06-30

Applicant: 内蒙古农业大学

Inventor： 曹贵方 ,  苏杰 ,  杨燕燕 ,  宋永利 ,  李喜和 ,  王彩云 ,  孙洋 ,  李秀男 ,  王大清

IPC: A01N1/02

Abstract: 本发明属于动物繁殖技术领域，具体涉及乳铁蛋白在羊精子保存中的应用。本发明通过在羊精子的冷冻保存液中加入乳铁蛋白，可以保持精子的活力与膜完整性，降低精子活性氧水平，提高解冻后精子的存活时间和品质。

公开(公告)号：CN108531492A

公开(公告)日：2018-09-14

申请号：CN201810364987.3

申请日：2018-04-23

Applicant: 内蒙古农业大学

Inventor： 曹贵方 ,  王鑫 ,  智达夫 ,  李喜和 ,  刘默凝 ,  李秀男 ,  魏薇 ,  田志鹏 ,  龙鑫 ,  王大清 ,  张福全

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明提供了一种利用类弹性蛋白elp构建活性绵羊β-防御素sbd-1体外表达的方法，属分子生物学领域，是通过 RT-PCR得到克隆了编码sbd-1的成熟肽全基因序列，与elp相连后，克隆入原核表达载体pet-22b中，构成表达载体pet-22b-elp-sbd-1；利用大肠杆菌偏爱密码子和 Gen Script rare codon analysis 软件获得优化密码子优化的elp-sbd-1基因序列并人工合成该基因，将重组载体转化BL21(DE3)大肠杆菌，IPTG诱导融合蛋白表达，利用ITC对其纯化，成功获得绵羊β-防御素sbd-1。本发明的优点是：利用类弹性蛋白elp具有温度敏感的可逆相变特性，用离心等简单方法分离纯化，作为重组蛋白的纯化标签,为代替抗生素提供理论基础，对大量生产β-防御素sbd-1提供方法依据。

公开(公告)号：CN112899375A

公开(公告)日：2021-06-04

申请号：CN202110356310.7

申请日：2021-04-01

Applicant: 内蒙古农业大学

Inventor： 曹贵方 ,  杨光 ,  宋永利 ,  窦傲蕾 ,  马腾 ,  智达夫 ,  苏红 ,  刘默凝 ,  杨宏新 ,  霍雨佳 ,  李喜和 ,  何亭漪 ,  杨燕燕 ,  达来 ,  李秀男

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/683 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明提供了一种鉴别呼伦贝尔短尾羊纯杂合个体的PCR‑RFLP方法及引物，利用Bci T130I限制性内切酶的特异性识别位点进行基因分型，以样本基因组DNA为模板，扩增呼伦贝尔短尾羊Brachyury/T基因，所扩增基因长度为203bp。上游引物所在Brachyury/T基因的95879504位点至95879486位点，下游引物位置为95879302位点至95879323位点；将PCR产物进行纯化后使用Bci T130I进行酶切；对酶切产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳观察结果，有着明显两条条带为纯合呼伦贝尔短尾羊，明显三条条带的为杂合呼伦贝尔短尾羊。本发明操作简便、反应不需要额外的分析步骤，并通过条带数量准确分型出纯、杂合基因型，酶切体系和时间不会引起Bci T130I酶的星活性。

公开(公告)号：CN108531493A

公开(公告)日：2018-09-14

申请号：CN201810365031.5

申请日：2018-04-23

Applicant: 内蒙古农业大学

Inventor： 曹贵方 ,  王鑫 ,  智达夫 ,  李喜和 ,  刘默凝 ,  李秀男 ,  魏薇 ,  田志鹏 ,  龙鑫 ,  王大清 ,  张福全

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 一种利用小泛素相关修饰物SUMO体外表达绵羊β-防御素的方法，利用SUMO融合技术通过RT-PCR扩增蒙古绵羊β防御素sbd -1基因，与SUMO相连后,连入Pet-22b中，获得pet-22b-SUMO-sbd-1重组质粒，转入到大肠杆菌BL21(DE3)细胞表达，成功构建pet-22b-SUMO-sbd-1重组载体，将表达产物通过超声破碎,脱盐,亲和层析,浓缩,SUMO酶切,冷冻干燥后,将其分别作用于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，通过抑菌实验证明，sbd-1对大肠杆菌BL21能形成抑菌环，并且抑菌作用与浓度相关，最终得到了绵羊β-防御素sbd-1，为下一步代替抗生素提供理论基础,以及对大量生产β-防御素(sbd-1)提供方法依据