一种基于Cas9切口酶偶联DNA聚合酶的恒温核酸检测分析方法及试剂盒

    公开(公告)号:CN110607355A

    公开(公告)日:2019-12-24

    申请号:CN201910119855.9

    申请日:2019-02-18

    Abstract: 本发明公开了一种基于Cas9切口酶偶联DNA聚合酶的恒温核酸检测分析方法,是在恒温条件下特异性检测靶标核酸;包括以下步骤:以两条分别与靶DNA序列互补的sgRNA序列,两组Cas9n-sgRNA复合物分别与前间区序列邻近基序毗邻的匹配靶DNA序列结合后,通过Cas9n单口切割酶活性和恒温DNA聚合酶链置换活性,获得一条单链靶DNA序列,该序列在引物1和引物2,DNA聚合酶及Cas9n-sgRNA复合物的共同作用下,在恒温条件下反复进行引物杂交,延伸,切割,链置换反应,扩增获得大量靶DNA序列,荧光染料与双链DNA产物结合产生荧光信号,实时测定反应体系中的荧光信号强度,与标准工作曲线对比,计算出靶标基因组或DNA序列的浓度。本发明尤其适用于核酸即时检测。

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