采用串联sgRNA同步激活多个猪内源性干细胞因子转录活性的方法

    公开(公告)号:CN110218741B

    公开(公告)日:2020-12-25

    申请号:CN201910474347.2

    申请日:2019-05-31

    Abstract: 本发明提供了一种采用串联sgRNA策略同步激活猪多个内源性干细胞因子的方法,首先利用杀稻瘟菌素和潮霉素药物筛选并构建了能稳定表达dCAS‑VP64和MS2‑P65‑HSF1的PK‑15细胞株(PK‑15‑dCas9‑MS2)。分别设计和构建能靶向猪干细胞因子Oct4、Sox2、Klf4、c‑Myc和miR‑302/367启动子的sgRNAs,在上述细胞上进行高活性的sgRNA筛选,将基因转录激活效率最高的5条sgRNA进行串联组合和构建表达载体,将其导入PK‑15‑dCas9‑MS2细胞中,同步激活猪OSKM和miR‑302/367转录活性,该技术对诱导产生猪的iPSC具有潜在的应用价值。

    采用串联sgRNA同步激活多个猪内源性干细胞因子转录活性的方法

    公开(公告)号:CN110218741A

    公开(公告)日:2019-09-10

    申请号:CN201910474347.2

    申请日:2019-05-31

    Abstract: 本发明提供了一种采用串联sgRNA策略同步激活猪多个内源性干细胞因子的方法,首先利用杀稻瘟菌素和潮霉素药物筛选并构建了能稳定表达dCAS-VP64和MS2-P65-HSF1的PK-15细胞株(PK-15-dCas9-MS2)。分别设计和构建能靶向猪干细胞因子Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc和miR-302/367启动子的sgRNAs,在上述细胞上进行高活性的sgRNA筛选,将基因转录激活效率最高的5条sgRNA进行串联组合和构建表达载体,将其导入PK-15-dCas9-MS2细胞中,同步激活猪OSKM和miR-302/367转录活性,该技术对诱导产生猪的iPSC具有潜在的应用价值。

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