一种纯化病毒样颗粒蛋白的方法及其应用

    公开(公告)号:CN102260651A

    公开(公告)日:2011-11-30

    申请号:CN201110171728.7

    申请日:2011-06-24

    IPC分类号: C12N7/01 C12N7/02 C12R1/92

    摘要: 本发明属于生物技术领域,具体涉及一种纯化病毒样颗粒蛋白的方法及其应用。这种高效的纯化病毒样颗粒蛋白的方法建立在一个低pH缓冲体系上,将含有病毒样颗粒的样品置于低pH缓冲体系中,这种强酸性缓冲环境能够使绝大部分杂蛋白变性和碎片化,经一步酸化后,蛋白就可以达到80%左右的纯度。通过简单离心和进一步的分离层析将变性蛋白和片段去除,获得纯化后的病毒样颗粒蛋白。公开了这种方法在纯化Qβ噬菌体病毒样颗粒蛋白、Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白和HK-97噬菌体病毒样颗粒蛋白的应用。这种纯化方法简单、成本低廉且有很高的纯化效率,有很大的应用前景。

    一种Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白的制备方法及其用途

    公开(公告)号:CN101921733A

    公开(公告)日:2010-12-22

    申请号:CN201010028904.7

    申请日:2010-01-05

    摘要: 一种Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白,按如下方法制备:步骤1)将Qβ噬菌体CP蛋白基因终止密码子由TGA突变为强终止密码子TAA后,克隆至原核表达载体pET28a(+)中,得到编码CP蛋白质粒pETQβ-CP;步骤2)在Qβ噬菌体CP延伸蛋白基因中编码免疫优势决定区位置,即Qβ噬菌体CP延伸蛋白基因第72位至73位密码子间,插入编码赖氨酸和亮氨酸的核苷酸AAGCTT,并将CP蛋白基因终止密码子由TGA突变为GGA后克隆至原核表达载体PGEX4T-2中,得到编码A1蛋白质粒pGEXQβ-A1;步骤3)突变后编码Qβ噬菌体CP蛋白质粒与A1蛋白质粒共同转化大肠杆菌,诱导后表达得到病毒样颗粒蛋白Qβ-2aa。使用异双功能交联剂将短肽抗原耦联至Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒。