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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110129246B
公开(公告)日：2021-02-19
申请号：CN201910355278.3
申请日：2019-04-29
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明提供了一株供体菌、其构建方法与应用以及质粒抑制剂筛选方法。所述的供体菌包含自杀型荧光质粒和pCRISPR‑LUX质粒，该供体菌本身不表达荧光；而所述的自杀型荧光质粒可通过接合转移进入受体菌，由于接合子脱离了失去核酸内切酶活性的Cas9蛋白的抑制而可以表达荧光。本发明还提供了所述的供体菌的构建方法及应用，所述的应用为通过分析接合子的荧光表达情况对接合转移效率进行定量分析或质粒抑制剂的筛选。同时，本发明还提供了一种基于CRISPR/dCas9筛选质粒抑制剂的方法，可实现高通量筛选抑制耐药质粒接合转移的物质，筛选过程高效、方便、快捷，适用范围较为广泛，为克服细菌耐药性提供新的思路和方法。
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公开(公告)号：CN111265506A
公开(公告)日：2020-06-12
申请号：CN202010136216.6
申请日：2020-03-02
Applicant: 华南农业大学
IPC: A61K31/20 , A61K31/201 , A61P31/04
Abstract: 本发明提供了棉籽油酸在制备质粒接合转移抑制剂和/或抗菌药物中的应用。本发明首次发现了棉籽油酸可有效抑制耐药质粒接合转移，在安全浓度范围内，棉籽油酸抗质粒接合转移效率达80％以上，并且抗质粒转移效果最好。同时，本发明研究发现棉籽油酸半数细胞毒性浓度为5.401mM，较现有技术中的其他植物油酸毒性更低、更为安全。本发明还发现了棉籽油酸有良好的抗菌活性，尤其是对革兰氏阳性菌的抗菌活性显著，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN110079540A
公开(公告)日：2019-08-02
申请号：CN201910282837.2
申请日：2019-04-10
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明共公开了一种基于mariner转座子构建自杀型质粒及耐药突变菌株的方法。该自杀型质粒的构建包括如下步骤：以pCat-marinerr质粒为模板进行PCR扩增，将获得的扩增产物作为质粒骨架；然后以pUC57-tpm质粒为模板扩增tpm抗性基因，再将质粒骨架和tpm抗性基因进行同源重组，得到所述自杀型质粒。本发明中的耐药突变菌株是将自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，然后将获得菌株和目标菌株混合培养，再用含有亚碲酸盐的单药板、以及含有亚碲酸盐和原抗性筛选标记药物的双药板进行筛选，得到耐药突变菌株。本发明方法操作简单，可高通量的获得转座突变株，适用于构建耐药菌株或筛选药物。
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公开(公告)号：CN110079540B
公开(公告)日：2020-07-31
申请号：CN201910282837.2
申请日：2019-04-10
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明共公开了一种基于mariner转座子构建自杀型质粒及耐药突变菌株的方法。该自杀型质粒的构建包括如下步骤：以pCat‑marinerr质粒为模板进行PCR扩增，将获得的扩增产物作为质粒骨架；然后以pUC57‑tpm质粒为模板扩增tpm抗性基因，再将质粒骨架和tpm抗性基因进行同源重组，得到所述自杀型质粒。本发明中的耐药突变菌株是将自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，然后将获得菌株和目标菌株混合培养，再用含有亚碲酸盐的单药板、以及含有亚碲酸盐和原抗性筛选标记药物的双药板进行筛选，得到耐药突变菌株。本发明方法操作简单，可高通量的获得转座突变株，适用于构建耐药菌株或筛选药物。
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公开(公告)号：CN110129246A
公开(公告)日：2019-08-16
申请号：CN201910355278.3
申请日：2019-04-29
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明提供了一株供体菌、其构建方法与应用以及质粒抑制剂筛选方法。所述的供体菌包含自杀型荧光质粒和pCRISPR-LUX质粒，该供体菌本身不表达荧光；而所述的自杀型荧光质粒可通过接合转移进入受体菌，由于接合子脱离了失去核酸内切酶活性的Cas9蛋白的抑制而可以表达荧光。本发明还提供了所述的供体菌的构建方法及应用，所述的应用为通过分析接合子的荧光表达情况对接合转移效率进行定量分析或质粒抑制剂的筛选。同时，本发明还提供了一种基于CRISPR/dCas9筛选质粒抑制剂的方法，可实现高通量筛选抑制耐药质粒接合转移的物质，筛选过程高效、方便、快捷，适用范围较为广泛，为克服细菌耐药性提供新的思路和方法。
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