转CmWRKY48基因切花菊的培育、鉴定方法及应用

    公开(公告)号:CN104372019B

    公开(公告)日:2017-06-06

    申请号:CN201410569007.5

    申请日:2014-10-22

    Abstract: 本发明属于植物基因工程和转基因育种领域,提供包括有CmWRKY48基因的重组载体、转化细胞、转CmWRKY48基因切花菊的培育、鉴定方法及应用。转CmWRKY48基因切花菊的培育方法包括如下步骤:(1)菊花CmWRKY48基因的克隆(2)植物表达载体pMDC43‑CmWRKY48的构建(3)农杆菌EHA105介导叶盘法转化菊花。对转化植株进行PCR、定量RT‑PCR检测证实CmWRKY48基因已整合到转基因植株基因组DNA中并发生转录。对转基因植株进行抗蚜性检测,转基因植株抗蚜能力有很大提高,为利用基因工程技术选育菊花抗逆品种提供新颖而实用的方法,将有效推动菊花生物技术育种进程。

    一种将外源基因转入菊花或近缘种进行瞬时表达的方法

    公开(公告)号:CN103882054B

    公开(公告)日:2017-01-04

    申请号:CN201410131935.3

    申请日:2014-04-02

    Abstract: 本发明提供一种通过农杆菌注射渗透法将外源基因转入菊花或近缘种进行瞬时表达的方法,该外源基因为GUS基因,由携带35s启动子及终止子,小于10kb的过量表达载体质粒携带。主要步骤包括(1)植株的获得(2)植物表达载体pORER1-2×35s:gus的构建(3)侵染液制备(4)菊花叶片的制备(5)叶片转化(6)叶片转化后培养7)阳性转化叶片检测。本发明通过选择合适的外植体、以农杆菌菌株作为易感菌株,通过利福平和卡那霉素选择侵染菌体;同时,以P19与农杆菌混合培养制成侵染液,P19能有效抑制植物对外源导入载体表达的沉默效应,提高表达量,并且合理优化共培养条件,使该方法转化时间缩短至45天左右,转化效率达到60%以上。本发明方法为更有效地筛选和分析菊花基因功能、蛋白质定位及进一步获得稳定转化子提供了可能。

    一种将外源基因转入菊花或近缘种进行瞬时表达的方法

    公开(公告)号:CN103882054A

    公开(公告)日:2014-06-25

    申请号:CN201410131935.3

    申请日:2014-04-02

    Abstract: 本发明提供一种通过农杆菌注射渗透法将外源基因转入菊花或近缘种进行瞬时表达的方法,该外源基因为GUS基因,由携带35s启动子及终止子,小于10kb的过量表达载体质粒携带。主要步骤包括(1)植株的获得(2)植物表达载体pORER1-2×35s:gus的构建(3)侵染液制备(4)菊花叶片的制备(5)叶片转化(6)叶片转化后培养(7)阳性转化叶片检测。本发明通过选择合适的外植体、以农杆菌菌株作为易感菌株,通过利福平和卡那霉素选择侵染菌体;同时,以P19与农杆菌混合培养制成侵染液,P19能有效抑制植物对外源导入载体表达的沉默效应,提高表达量,并且合理优化共培养条件,使该方法转化时间缩短至45天左右,转化效率达到60%以上。本发明方法为更有效地筛选和分析菊花基因功能、蛋白质定位及进一步获得稳定转化子提供了可能。

    一种基于转录组测序开发菊属植物SSR引物的方法

    公开(公告)号:CN103233075A

    公开(公告)日:2013-08-07

    申请号:CN201310170677.5

    申请日:2013-05-09

    Abstract: 本发明属于生物技术领域,涉及一种基于转录组测序开发菊属植物SSR引物的方法。利用EST‐SSR的种间转移性,在转录组测序的基础上,结合Perl编程语言方法,对大量序列信息进行批量处理,进行SSR序列查找和SSR标记引物设计,克服了SSR开发效率低、耗时久、成本高等障碍。选择菊属不同种的材料对设计的SSR引物进行验证,若有条带检测出,即为成功的SSR引物。应用本方法成功地设计了1788对SSR引物,为菊属SSR引物开发进而实现分子标记辅助选择育种和比较基因组学研究提供了新的方法和思路。

    一种切花菊全生育期氮肥精确施用的方法

    公开(公告)号:CN116034700B

    公开(公告)日:2024-05-17

    申请号:CN202211500252.1

    申请日:2022-11-28

    Abstract: 本发明公布了一种切花菊全生育期氮肥精确施用的方法;包括以下步骤:a、苗期:切花菊生根缓苗结束后进入苗期,期间氮肥管理为4‑8mg氮/(株*日);b、旺盛生长期:切花菊冠层封行后,地上部迅速生长,进入旺盛生长期,期间氮肥管理为8‑12mg氮/(株*日);c、花芽分化期:切花菊停光后进入花芽分化期,花芽分化的第一周只灌溉清水,促进切花菊由营养生长向生殖生长的转化,之后氮肥管理为2‑4mg氮/(株*日);d、现蕾‑破膜期:切花菊出现顶蕾后进入现蕾‑破膜期,现蕾初的两周氮肥管理为1‑2mg氮/(株*日),两周后停肥;e、破膜‑采花期:切花菊破膜到采花期间只灌溉清水。本发明根据切花菊生育期的氮肥需求,将氮肥管理精确到各个生育期的单株单日施氮量。

    一种通过人工调控提高菊花根尖有丝分裂相的方法

    公开(公告)号:CN109856330B

    公开(公告)日:2021-05-28

    申请号:CN201910085871.0

    申请日:2019-01-29

    Abstract: 本发明公开了一种通过人工调控提高菊花根尖有丝分裂相的方法。利用人工调控的方法,即通过实验验证的合适的暗处理和光照(强)时间来对菊花组培苗进行处理,不仅获得了较为干净的染色体制片,还有效提高细胞有丝分裂中期分裂相数量(见图1、图2)。本发明利用的原材料易得,简单易行,成本低廉,可操作性强,实用性突出;通过暗处理和光照处理,提高在菊花染色体制片观察时其有丝分裂中期相的数量,且获得干净的根尖有丝分裂中期染色体图像,可用于菊花有丝分裂染色体的鉴定,同时也有助于获得用于核型分析、FISH分析等细胞学研究。而这种获得清晰的菊花根尖有丝分裂中期的染色体图像的方法可推广至菊属其他植物的细胞学研究中。

    一种通过人工调控提高菊花根尖有丝分裂相的方法

    公开(公告)号:CN109856330A

    公开(公告)日:2019-06-07

    申请号:CN201910085871.0

    申请日:2019-01-29

    Abstract: 本发明公开了一种通过人工调控提高菊花根尖有丝分裂相的方法。利用人工调控的方法,即通过实验验证的合适的暗处理和光照(强)时间来对菊花组培苗进行处理,不仅获得了较为干净的染色体制片,还有效提高细胞有丝分裂中期分裂相数量(见图1、图2)。本发明利用的原材料易得,简单易行,成本低廉,可操作性强,实用性突出;通过暗处理和光照处理,提高在菊花染色体制片观察时其有丝分裂中期相的数量,且获得干净的根尖有丝分裂中期染色体图像,可用于菊花有丝分裂染色体的鉴定,同时也有助于获得用于核型分析、FISH分析等细胞学研究。而这种获得清晰的菊花根尖有丝分裂中期的染色体图像的方法可推广至菊属其他植物的细胞学研究中。

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