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公开(公告)号：CN116693597B
公开(公告)日：2024-06-21
申请号：CN202310231118.4
申请日：2023-03-09
申请人： 南京大学
摘要： 本发明属于有机合成和应用领域，具体涉及对蛋白质、多肽或苯酚衍生物进行硝基化的方法。本发明提供了一种光催化硝基化方法，借助钌(Ru)催化剂在可见光(460‑465nm)下实现蛋白质、多肽或苯酚衍生物的硝基化。该方法通过激发的光催化剂来引发DNIm介导的硝基化反应，该反应发生在催化剂周围的局部空间中。由于该反应有很好的空间分辨率，可利用与靶蛋白配体结合的Ru催化剂，在混合蛋白质样品和细胞裂解物中实现了选择性蛋白质硝基化修饰。
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公开(公告)号：CN118480521A
公开(公告)日：2024-08-13
申请号：CN202410527085.2
申请日：2024-04-29
申请人： 南京大学
摘要： 本发明公开了一种高酶活的过氧化氢酶突变体及其应用，过氧化氢酶突变体由野生型过氧化氢酶的活性位点的氨基酸残基进行定向进化得到，包含A132G、T149L、M158L、M349V中的任意一种突变或其组合。本发明公开的过氧化氢酶突变体的酶活显著提高；本发明提供一种包含高酶活的过氧化氢酶突变体的催化剂，催化反应的温度条件与酸碱度条件易于实现，具有工业化生产应用基础；本发明提供编码上述过氧化氢酶突变体的基因、包含编码上述过氧化氢酶突变体的基因的表达载体、包含该表达载体的重组菌；本发明提供上述过氧化氢酶突变体的制备及应用方法。
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公开(公告)号：CN118792291A
公开(公告)日：2024-10-18
申请号：CN202411003605.6
申请日：2024-07-25
申请人： 南京大学
摘要： 本发明公开了一种高立体选择性的D‑苏氨酸醛缩酶突变体及其应用，所述突变体由野生型D‑苏氨酸醛缩酶定向进化得到，包括第146位天冬酰胺变为甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺中的任意一种，和/或第147位精氨酸突变为苯丙氨酸、酪氨酸中的任意一种，和/或第148位半胱氨酸突变为苯丙氨酸，和/或第177位酪氨酸突变为苯丙氨酸、组氨酸、色氨酸中的任意一种，和/或第312位丝氨酸突变为丙氨酸、亮氨酸、苏氨酸中的任意一种。本发明提供的D‑苏氨酸醛缩酶突变体在合成D‑thero对甲砜基苯丝氨酸时具有较高的Cβ立体选择性和产率；应用所述突变体的反应条件温和、易于实现，在医药化工领域具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN118480519A
公开(公告)日：2024-08-13
申请号：CN202410527080.X
申请日：2024-04-29
申请人： 南京大学
摘要： 本发明公开了一种底物选择性提高的核糖醇脱氢酶突变体及其应用，核糖醇脱氢酶突变体由野生型核糖醇脱氢酶的底物结合位点的氨基酸残基发生定向突变得到，包含E168D、V172T、F310W中的任意一种突变或其组合。本发明公开的核糖醇脱氢酶突变体可以在果糖和阿洛酮糖的混合底物体系中，选择性识别果糖作为底物，催化生成山梨醇，实现底物选择性和转化率的显著提高；本发明提供一种包含底物选择性提高的核糖醇脱氢酶突变体的催化剂，催化反应的温度条件与酸碱度条件易于实现；本发明提供编码上述核糖醇脱氢酶突变体的基因、包含编码上述核糖醇脱氢酶突变体的基因的表达载体、包含该表达载体的重组菌；本发明还提供上述核糖醇脱氢酶突变体的制备及应用方法。
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公开(公告)号：CN118652867A
公开(公告)日：2024-09-17
申请号：CN202410964525.0
申请日：2024-07-18
申请人： 南京大学
摘要： 本发明公开了一种D‑氨基酸氧化酶突变体及其在制备L‑草铵膦中的应用，所述突变体是将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第50位、第52位、第331位这三个位点中至少有一个氨基酸进行置换；第50位天冬酰胺Asn突变为组氨酸His或精氨酸Arg，第52位亮氨酸Leu突变为天冬酰胺Asn，第331位丙氨酸Ala突变为丝氨酸Ser；通过对D‑氨基酸氧化酶的活性位点进行突变，最终获得的突变体提高了在氧化D‑草铵膦为2‑羰基‑4‑[羟基(甲基)膦酰基]丁酸的生产工艺中的催化效率。
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公开(公告)号：CN118460490A
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202410592571.2
申请日：2024-05-14
申请人： 南京大学
摘要： 本发明公开了一种高底物选择性的核糖醇脱氢酶突变体及其在催化还原D‑阿洛酮糖中的应用，所述核糖醇脱氢酶突变体由野生型核糖醇脱氢酶定向进化得到，包含V152L、E157N、V193L中的任意一种突变或其组合。本发明公开的核糖醇脱氢酶突变体可以在D‑阿洛酮糖与D‑果糖的混合底物体系中，选择性识别D‑阿洛酮糖作为底物，实现底物选择性和转化率的显著提高；本发明公开一种包含底物选择性提高的核糖醇脱氢酶突变体的产品、制备方法及应用，所述酶突变体催化反应所需温度与酸碱度易于实现；本发明公开编码上述核糖醇脱氢酶突变体的核酸分子、包含编码上述核糖醇脱氢酶突变体的核酸分子的表达载体、包含该表达载体的重组细胞。
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公开(公告)号：CN118374468A
公开(公告)日：2024-07-23
申请号：CN202410592573.1
申请日：2024-05-14
申请人： 南京大学
摘要： 本发明公开了一种转氨酶突变体及其在(S)‑苯并二氢吡喃‑4‑胺制备上的应用，所述转氨酶突变体由野生型转氨酶定向进化得到，包含C60W、V242A、L272M中的任意一种突变或其组合。本发明公开的转氨酶突变体可以底物特异性识别苯并二氢吡喃‑4‑酮，高效合成(S)‑苯并二氢吡喃‑4‑胺，实现立体选择性和产率的显著提高；本发明公开一种制备(S)‑苯并二氢吡喃‑4‑胺的产品，所述产品包含具有高产率、高立体性选择性的转氨酶突变体或其编码基因或相应表达载体或相应重组细胞，所述产品应用的温度条件与酸碱度条件易于实现，具有工业化应用基础；本发明还公开了该突变体的制备方法及其应用，有助于(S)‑苯并二氢吡喃‑4‑胺的工业化生产与应用。
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公开(公告)号：CN118360263A
公开(公告)日：2024-07-19
申请号：CN202410562403.9
申请日：2024-05-08
申请人： 南京大学
摘要： 本发明公开了一种高催化活性的甲酸脱氢酶突变体及其在还原型辅酶Ⅰ(NADH)再生中的应用，所述甲酸脱氢酶突变体由野生型甲酸脱氢酶定向进化得到，包含N24D、K185S、M334I、V377T中的任意一种突变或其组合。本发明公开的甲酸脱氢酶突变体对再生NADH具有高催化活性，并且公开一种能够高效再生NADH的产品，所述产品包含具有高催化活性的甲酸脱氢酶突变体或其编码基因或相应表达载体或相应重组细胞，所述产品应用的温度条件与酸碱度条件易于实现，具有工业化应用基础；本发明还公开一种高催化活性的甲酸脱氢酶突变体的制备方法及其应用，在NADH再生中具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN117904079A
公开(公告)日：2024-04-19
申请号：CN202410200479.7
申请日：2024-02-23
申请人： 南京大学
摘要： 本发明公开了一种α‑淀粉酶突变体及其基因、载体和制备方法。α‑淀粉酶突变体的点突变包括对原始酶氨基酸序列的第63位、第115位、第261位、第262位、第266位、第316位、第317位进行置换突变。该突变体的制备方法为：设计点突变引物，以原始酶基因为模板，采用点突变引物进行PCR反应得到突变基因和线性化质粒；将突变基因与线性化表达载体一步克隆连接后转入宿主菌进行发酵表达；收集重组菌后破碎细胞，离心取上清即得突变酶。基于该方法提供一种编码上述α‑淀粉酶突变体蛋白的基因并基于该基因序列构建了含有上述基因的克隆载体或表达载体。本发明中α‑淀粉酶突变体的热稳定性和pH耐受性较好，适用于工业生产。
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公开(公告)号：CN116693597A
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202310231118.4
申请日：2023-03-09
申请人： 南京大学
摘要： 本发明属于有机合成和应用领域，具体涉及对蛋白质、多肽或苯酚衍生物进行硝基化的方法。本发明提供了一种光催化硝基化方法，借助钌(Ru)催化剂在可见光(460‑465nm)下实现蛋白质、多肽或苯酚衍生物的硝基化。该方法通过激发的光催化剂来引发DNIm介导的硝基化反应，该反应发生在催化剂周围的局部空间中。由于该反应有很好的空间分辨率，可利用与靶蛋白配体结合的Ru催化剂，在混合蛋白质样品和细胞裂解物中实现了选择性蛋白质硝基化修饰。
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