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公开(公告)号：CN106497979B
公开(公告)日：2019-10-01
申请号：CN201610905578.0
申请日：2016-10-17
申请人： 四川农业大学
IPC分类号： C12N15/90
摘要： 本发明公开了高效缺失鸭疫里默氏杆菌基因的方法，具体方法是将由待缺基因上游片段、抗性基因片段和待缺基因下游片段组成的融合片段通过自然转移转入鸭疫里默氏杆菌，然后用所述抗性基因的抗生素筛选即获得缺失基因的鸭疫里默氏杆菌，该方法简单，将缺失基因构建融合片段后可以直接与宿主菌发生自然交换，并且培养周期短，转化率高，能够高效缺失鸭疫里默氏杆菌基因，为鸭疫里默氏杆菌基因功能及减毒疫苗研制提供了工具。
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公开(公告)号：CN106520818A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201611116704.0
申请日：2016-12-07
申请人： 四川农业大学
IPC分类号： C12N15/74
摘要： 本发明涉及一种快速回补鸭疫里默氏杆菌缺失基因的方法，具体为：构建含有目的基因的重组穿梭质粒，然后加入含有MgCl2的活化的鸭疫里默氏杆菌菌液中，37℃孵育30分钟，然后加入含MgCl2的GCB培养基孵育7小时，涂布在含对应抗性固体GCB培养基上，37℃培养箱培养18-24h至单克隆长出，即获得鸭疫里默氏杆菌回补菌株；本发明的方法简单，载体重组后不需要转入供体菌，直接可进入宿主菌并发挥相关基因功能；并且培养周期短，一般情况下18小时就能分离到回补株克隆；成本低，为鸭疫里默氏杆菌基因功能验证提供了工具。
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公开(公告)号：CN106434701A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610903474.6
申请日：2016-10-17
申请人： 四川农业大学
CPC分类号： C07K14/195 , C12N15/74 , C12N2800/101
摘要： 本发明公开了鸭疫里默氏杆菌的rpsL突变基因及其应用，rpsL突变基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，含有该突变基因的鸭疫里默氏杆菌对链霉素不敏感，可以用于构建鸭疫里默氏杆菌无痕缺失候选菌株，利用该菌株无痕缺失无需通过抗性基因来替代目的基因，大大降低了缺失株的耐药性，可以用于基因缺失疫苗的制备；同时可以在基因组内缺失多个基因，提高了基因功能研究的效率，具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN105256074A
公开(公告)日：2016-01-20
申请号：CN201510796329.8
申请日：2015-11-17
申请人： 四川农业大学
CPC分类号： C12Q1/6851 , C12Q2531/113 , C12Q2537/143 , C12Q2545/113 , C12Q2561/101
摘要： 本发明公开了一种双重TaqMan荧光定量RT-PCR检测鸭甲肝病毒的试剂盒及方法，所述试剂盒中应用的引物对和探针包括检测1型鸭甲肝病毒VP0基因和3型鸭甲肝病毒VP3基因的引物对和探针。对样品RNA进行RT-PCR扩增后通过FQ-PCR仪自带软件自动分析读取结果，判断样品是否含1型和3型鸭甲肝病毒：若出现Ct
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公开(公告)号：CN102183658A
公开(公告)日：2011-09-14
申请号：CN201110047062.4
申请日：2011-02-28
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
IPC分类号： G01N33/68 , G01N33/531
摘要： 本发明涉及动物医学领域，特别涉及用于检测鸭瘟病毒抗体的方法，具体包括固相抗原的制备、一抗结合、二抗结合、显色及检测并判定等步骤，本方法是基于纯化的重组UL55蛋白建立的间接ELISA法，其特异性好，对鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、鸭疫里默氏菌(RA)、鸭大肠杆菌(E.coli)、鸭源沙门氏菌(Salmonella)、鸭肿头性出血症病毒和鸭源流感病毒的阳性血清进行检测，结果均为阴性；该方法的对酶标板内或板间重复试验显示变异系数均小于10％，能检出经1∶6400倍稀释的DPV弱毒疫苗免疫鸭的阳性血清。
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公开(公告)号：CN106520818B
公开(公告)日：2019-12-03
申请号：CN201611116704.0
申请日：2016-12-07
申请人： 四川农业大学
IPC分类号： C12N15/74
摘要： 本发明涉及一种快速回补鸭疫里默氏杆菌缺失基因的方法，具体为：构建含有目的基因的重组穿梭质粒，然后加入含有MgCl2的活化的鸭疫里默氏杆菌菌液中，37℃孵育30分钟，然后加入含MgCl2的GCB培养基孵育7小时，涂布在含对应抗性固体GCB培养基上，37℃培养箱培养18‑24h至单克隆长出，即获得鸭疫里默氏杆菌回补菌株；本发明的方法简单，载体重组后不需要转入供体菌，直接可进入宿主菌并发挥相关基因功能；并且培养周期短，一般情况下18小时就能分离到回补株克隆；成本低，为鸭疫里默氏杆菌基因功能验证提供了工具。
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公开(公告)号：CN106497979A
公开(公告)日：2017-03-15
申请号：CN201610905578.0
申请日：2016-10-17
申请人： 四川农业大学
IPC分类号： C12N15/90
摘要： 本发明公开了高效缺失鸭疫里默氏杆菌基因的方法，具体方法是将由待缺基因上游片段、抗性基因片段和待缺基因下游片段组成的融合片段通过自然转移转入鸭疫里默氏杆菌，然后用所述抗性基因的抗生素筛选即获得缺失基因的鸭疫里默氏杆菌，该方法简单，将缺失基因构建融合片段后可以直接与宿主菌发生自然交换，并且培养周期短，转化率高，能够高效缺失鸭疫里默氏杆菌基因，为鸭疫里默氏杆菌基因功能及减毒疫苗研制提供了工具。
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公开(公告)号：CN106497960A
公开(公告)日：2017-03-15
申请号：CN201611038010.X
申请日：2016-11-23
申请人： 四川农业大学
IPC分类号： C12N15/74
CPC分类号： C12N15/74 , C12N2800/101 , C12N2820/55 , C12N2830/34
摘要： 本发明涉及一种用于大肠杆菌-鸭疫里默氏杆菌的高效穿梭质粒、制备方法及其应用，穿梭质粒的基因序列如SEQ ID NO.1所示，是在质粒pPM5的基础上进行改造的，先将鸭疫里默氏杆菌复制起始基因(pRA0726 ori)克隆到此质粒中，然后将转移位点(oriT)克隆到上述质粒中，使此穿梭质粒能够通过高效的结合转移导入鸭疫里默氏杆菌中，且能稳定的复制。为了方便基因片段插入穿梭质粒上且提高基因的表达量，将在穿梭质粒上克隆一段带有多个内切酶位点的高表达启动子序列(High EXP)。本发明所得穿梭质粒可以在鸭疫里默氏杆菌中稳定存在，用于基因敲除株的回补。质粒较小且具有多个多克隆位点，易于操作。结合转移效率非常高。
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