公开(公告)号：CN118895247A

公开(公告)日：2024-11-05

申请号：CN202410572714.3

申请日：2024-05-10

申请人： 四川大学华西医院 ,  济南市儿童医院(山东大学附属儿童医院)

发明人： 李亚楠 ,  王川 ,  孔萌 ,  吉毅

IPC分类号： C12N5/09 ,  C12N5/071 ,  G01N1/30

摘要： 本发明涉及生物医疗领域，具体涉及卡波西样血管内皮瘤细胞及动物模型的构建方法及应用。通过新鲜的猪主动脉得到DAM溶液。在无菌条件下，用手术剪将血管瘤样本切碎，利用血管特异性DAM包被组织碎片，采用内皮细胞培养基培养。14天后利用胰酶消化分解孵育出的细胞，获得原代KHE细胞。使用流式细胞仪从原代培养物中无菌分选CD31+细胞(CD31+KHE cell)，在37℃含5％CO2的湿化环境中，对CD31+KHE cell进行培养。将原代CD31+KHE cell悬浮于血管特异性DAM中，然后注射到6周龄雄性裸鼠的右大腿区域皮下，每只细胞数量为1×107。在注射后的第10天，对这些动物实施安乐死，并采集其皮下移植瘤，随后固定在10％中性缓冲福尔马林中，用于后续免疫荧光。

公开(公告)号：CN115651912A

公开(公告)日：2023-01-31

申请号：CN202211333450.3

申请日：2022-10-28

申请人： 四川大学华西医院

发明人： 李亚楠 ,  朱星龙 ,  吉毅 ,  包骥

IPC分类号： C12N5/09 ,  C12Q1/02

摘要： 本发明属于生物医学领域，公开了一种婴儿血管瘤CD31+HemECs3D微肿瘤模型的构建方法及应用，包括：在无菌条件，用手术剪将血管瘤样本切碎，采用胶原酶A消化剪碎的组织；使用流式细胞仪从原代培养物中无菌分选CD31+细胞，在37℃含5％CO2的湿化环境中，对CD31+HemECs进行培养；将新鲜的猪主动脉浸泡在含有100U/ml青霉素和100g/ml链霉素的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中，置于冰上后立即转入实验室，进行猪主动脉去细胞化及血管特异性DAM特征；分析脱细胞猪主动脉细胞外基质水凝胶的特性；制备微图案阵列打印3D培养皿，形成CD31+HemEC微肿瘤；评估模型对IH一线治疗药物普萘洛尔的适用性。本发明为IH的机制探索和药物筛选提供更加稳定和高效的实验模型，有利于维持肿瘤的异质性，模拟体内瘤体组织。