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公开(公告)号：CN112522173B
公开(公告)日：2023-06-16
申请号：CN202011539757.X
申请日：2020-12-23
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明目的是通过对基因工程宿主的定向改造，提供一株能够高效稳定生产异源蛋白酶的基因工程菌，以解淀粉芽孢杆菌为宿主，首先将宿主的8种胞外蛋白酶aprE、epr、mpr、vpr、nprE、bpr、wprA、aprX缺失，得到胞外蛋白酶缺陷型菌株；还将宿主的α‑淀粉酶和胞外多糖基因簇eps缺失；还将表达异源碱性蛋白酶的高拷贝质粒导入宿主，得到一株高效生产异源碱性蛋白酶的基因工程菌。并且该工程菌在发酵过程中粘性大大降低，利于产物蛋白酶的分离纯化。
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公开(公告)号：CN112522173A
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011539757.X
申请日：2020-12-23
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明目的是通过对基因工程宿主的定向改造，提供一株能够高效稳定生产异源蛋白酶的基因工程菌，以解淀粉芽孢杆菌为宿主，首先将宿主的8种胞外蛋白酶aprE、epr、mpr、vpr、nprE、bpr、wprA、aprX缺失，得到胞外蛋白酶缺陷型菌株；还将宿主的α‑淀粉酶和胞外多糖基因簇eps缺失；还将表达异源碱性蛋白酶的高拷贝质粒导入宿主，得到一株高效生产异源碱性蛋白酶的基因工程菌。并且该工程菌在发酵过程中粘性大大降低，利于产物蛋白酶的分离纯化。
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公开(公告)号：CN102433312A
公开(公告)日：2012-05-02
申请号：CN201110389135.8
申请日：2011-11-30
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种D-3-磷酸甘油酸脱氢酶，其氨基酸序列见序列1，其L-丝氨酸的抑制常数Ki＞250mM，以及一种D-3-磷酸甘油酸脱氢酶的编码基因，基因序列见序列2。本发明提供的PGDH的氨基酸序列与大肠杆菌野生型PGDH的氨基酸序列(序列3)的不同之处在于第344位氨基酸不是组氨酸而是丙氨酸且第346位氨基酸不是天冬酰胺而是丙氨酸，突变产生的PGDH不受L-丝氨酸的抑制，且本发明的PGDH变体的酶活性与野生型相比未发生改变。
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公开(公告)号：CN111153968B
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN202010074806.0
申请日：2020-01-22
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明公开了一种提高外源碱性蛋白酶表达量的信号肽突变体及其构建方法与用途，属于基因工程技术领域。所述突变体是将来源于芽孢杆菌的Sec途径的信号肽的C端第‑1位和/或第‑3位氨基酸突变为丙氨酸,即将C端的最后三位氨基酸序列突变为AXA或者在信号肽C端后增加氨基酸序列AXA，所述X为任意氨基酸。本发明构建方法简单易行，适用于枯草芽孢杆菌系统，信号肽突变后的碱性蛋白酶表达量均高于未突变体。本发明为介导枯草芽孢杆菌表达系统中异源碱性蛋白酶基因的表达奠定基础，有效推动了碱性蛋白酶的高效表达及工业化生产。
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公开(公告)号：CN111205354A
公开(公告)日：2020-05-29
申请号：CN202010074786.7
申请日：2020-01-22
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明公开了一种提高异源蛋白分泌量的信号肽突变体及其构建方法与用途，属于基因工程技术领域。本发明中的信号肽突变体是将来源于革兰氏阳性菌Sec途径的信号肽N区的带电荷氨基酸进行定点突变，使N区氨基酸的电荷密度为0.2～0.8之间；对所述信号肽H区进行突变，使H区的氨基酸疏水性在0～70之间；对所述信号肽C区的氨基酸进行定点突变，使C区最后三位氨基酸突变为丙氨酸-任意氨基酸-丙氨酸。本发明可以有效提高异源蛋白在微生物宿主中的分泌量，有效推动了目的蛋白的高效表达及工业化生产。
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公开(公告)号：CN112521466B
公开(公告)日：2022-06-17
申请号：CN202011580792.6
申请日：2020-01-22
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明公开了一种提高异源蛋白分泌量的信号肽突变体及其用途，属于基因工程技术领域。本发明中的信号肽突变体是将来源于革兰氏阳性菌Sec途径的信号肽N区的带电荷氨基酸进行定点突变，使N区氨基酸的电荷密度为0.2～0.8之间；对所述信号肽H区进行突变，使H区的氨基酸疏水性在0～70之间；对所述信号肽C区的氨基酸进行定点突变，使C区最后三位氨基酸突变为丙氨酸‑任意氨基酸‑丙氨酸。本发明可以有效提高异源蛋白在微生物宿主中的分泌量，有效推动了目的蛋白的高效表达及工业化生产。
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公开(公告)号：CN111087476B
公开(公告)日：2021-08-17
申请号：CN201911407764.1
申请日：2019-12-31
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明公开了一种提高外源蛋白表达量的双信号肽及其构建方法与用途，属于基因工程技术领域。所述双信号肽来源于芽孢杆菌Sec途径中不同的信号肽的组合。本发明通过从枯草芽孢杆菌信号肽库中，构建双信号肽组合与目的蛋白即蔗糖异构酶、果聚糖蔗糖酶或角蛋白酶基因相结合的表达载体，实现了外源基因的高表达，特别是为枯草芽孢杆菌表达外源基因提供了有效的表达元件及其组合方法。
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公开(公告)号：CN111205354B
公开(公告)日：2021-01-22
申请号：CN202010074786.7
申请日：2020-01-22
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明公开了一种提高异源蛋白分泌量的信号肽突变体及其构建方法与用途，属于基因工程技术领域。本发明中的信号肽突变体是将来源于革兰氏阳性菌Sec途径的信号肽N区的带电荷氨基酸进行定点突变，使N区氨基酸的电荷密度为0.2～0.8之间；对所述信号肽H区进行突变，使H区的氨基酸疏水性在0～70之间；对所述信号肽C区的氨基酸进行定点突变，使C区最后三位氨基酸突变为丙氨酸‑任意氨基酸‑丙氨酸。本发明可以有效提高异源蛋白在微生物宿主中的分泌量，有效推动了目的蛋白的高效表达及工业化生产。
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公开(公告)号：CN111087476A
公开(公告)日：2020-05-01
申请号：CN201911407764.1
申请日：2019-12-31
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明公开了一种提高外源蛋白表达量的双信号肽及其构建方法与用途，属于基因工程技术领域。所述双信号肽来源于芽孢杆菌Sec途径中不同的信号肽的组合。本发明通过从枯草芽孢杆菌信号肽库中，构建双信号肽组合与目的蛋白即蔗糖异构酶、果聚糖蔗糖酶或角蛋白酶基因相结合的表达载体，实现了外源基因的高表达，特别是为枯草芽孢杆菌表达外源基因提供了有效的表达元件及其组合方法。
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公开(公告)号：CN102703371A
公开(公告)日：2012-10-03
申请号：CN201210227658.7
申请日：2012-07-03
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种高产L－丝氨酸的大肠杆菌工程菌及其发酵方法，该菌株名为大肠杆菌（Escherichia coli）Q3，保藏编号为CGMCC 6213，其基因型为MG1655△sdaA△sdaB△tdcG：：Cm。以野生型大肠杆菌为对照，培养结果表明，在发酵培养基（蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L、氯化钠10g/L、葡萄糖10g/L）中，并且在发酵条件为：pH值为7.0，温度37±1℃，摇床转速200±20转/min，发酵时间48±3h的培养条件下，经发酵本发明的工程菌株L－丝氨酸的积累量提高了约40%，为其作为平台构建磷脂酰丝氨酸高产菌株奠定了基础，具有重要的应用前景和价值。
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