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公开(公告)号：CN102703552B
公开(公告)日：2014-10-29
申请号：CN201210150051.3
申请日：2012-05-15
申请人： 山东阿华生物药业有限公司 , 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
摘要： 本发明公开了一种由人胰岛素前体制备人胰岛素的方法，包括以下步骤：（1）在水相缓冲液中将人胰岛素前体进行酶切反应得到B链第30位缺少苏氨酸的人双链胰岛素前体desB30；（2）在有机相中将双链人胰岛素前体desB30进行转肽反应得到胰岛素酯；（3）将胰岛素酯脱酯，即得。本发明方法方法相比于现有的将人胰岛素前体一步转化成人胰岛素酯的方法，转肽效率有显著提高，转肽反应时间大幅缩短，副产物少，整体收率更高，成本更低。本发明对于规模化、工业化利用毕赤酵母表达生产重组人胰岛素提供了一种简捷、高效的方法。
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公开(公告)号：CN102703552A
公开(公告)日：2012-10-03
申请号：CN201210150051.3
申请日：2012-05-15
申请人： 山东阿华生物药业有限公司 , 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
摘要： 本发明公开了一种由人胰岛素前体制备人胰岛素的方法，包括以下步骤：（1）在水相缓冲液中将人胰岛素前体进行酶切反应得到B链第30位缺少苏氨酸的人双链胰岛素前体desB30；（2）在有机相中将双链人胰岛素前体desB30进行转肽反应得到胰岛素酯；（3）将胰岛素酯脱酯，即得。本发明方法方法相比于现有的将人胰岛素前体一步转化成人胰岛素酯的方法，转肽效率有显著提高，转肽反应时间大幅缩短，副产物少，整体收率更高，成本更低。本发明对于规模化、工业化利用毕赤酵母表达生产重组人胰岛素提供了一种简捷、高效的方法。
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公开(公告)号：CN1724671B
公开(公告)日：2011-07-20
申请号：CN200510027530.6
申请日：2005-07-04
申请人： 山东东阿阿胶股份有限公司 , 华东理工大学
摘要： 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种重组人内皮抑素表达菌株及其可溶性表达方法。本发明提供了一种重组人内皮抑素的表达菌株和可溶性表达的方法。该菌株含有表达载体pET-Endo，该表达载体由人内皮抑素基因插入载体pET43.1a获得。培养该表达菌株，用终浓度0.1～1.0mmol/L的IPTG诱导，诱导温度25～30℃，诱导时间6～10h，外源蛋白可溶性表达量可达到总表达量的80％以上，总表达量为菌体总蛋白的50％左右。因而本发明克服了人内皮抑素以包涵体形式表达的缺陷。本发明可用于重组人内皮抑素的制备及其它重组蛋白的可溶性表达。
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公开(公告)号：CN101157896B
公开(公告)日：2011-04-27
申请号：CN200710046231.6
申请日：2007-09-21
申请人： 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
摘要： 本发明提供了一种有利于减少水蛭素降解的重组毕赤酵母菌株，其内含有失活的KEXl基因，相对于未失活的KEXl基因，失活的KEXl基因的编码区及非编码区插入了或缺失了DNA片段，更具体地，失活的KEXl基因的编码区缺失了第289～1728位碱基序列，即其编码的蛋白酶缺失了第97～576位氨基酸，采用该重组毕赤酵母菌株表达水蛭素的发酵过程中，完整水蛭素占总水蛭素的比例达到60％～90％，完整水蛭素产量达到2.9g/1。还提供了一种制备上述重组毕赤酵母菌株的方法。本发明有利于减少水蛭素降解的重组毕赤酵母菌株能有效减少发酵过程中水蛭素的降解，提高水蛭素的产量，并有助于下游的纯化，使得生产成本降低。
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公开(公告)号：CN101812509A
公开(公告)日：2010-08-25
申请号：CN200910200773.3
申请日：2009-12-25
申请人： 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明提供了一种中药中马种源性成分的PCR鉴定方法，包括下列步骤：a)提取所述中药中的DNA；b)用根据具有马特异性的卫星序列设计的马种源性特异性引物对所述DNA进行PCR扩增，获得扩增产物；c)电泳所述扩增产物，通过电泳结果判断所述DNA是否扩增出阳性扩增条带，如果所述DNA扩增出所述阳性扩增条带，则所述中药源自马种动物，含有马种源性成分；如果所述DNA没有扩增出所述阳性扩增条带，则所述中药并不源自马种动物，也不含有任何马种源性成分。本发明操作简单、灵敏快速、成本低、能有效鉴定马种源性产品的真伪，特别适用于鉴定因深度加工而导致DNA含量极少、片段极短的深度加工型马皮胶的真伪，适于大规模推广应用。
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公开(公告)号：CN101812508A
公开(公告)日：2010-08-25
申请号：CN200910200772.9
申请日：2009-12-25
申请人： 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明提供了一种中药中牛种源性成分的PCR鉴定方法，包括下列步骤：a)提取所述中药中的DNA；b)用根据具有牛种动物特异性的卫星序列设计的牛种源性特异性引物对所述DNA进行PCR扩增，获得扩增产物；c)电泳所述扩增产物，通过电泳结果判断所述DNA是否扩增出阳性扩增条带，如果所述DNA扩增出所述阳性扩增条带，则所述中药源自牛种动物，含有牛种源性成分；如果所述DNA没有扩增出所述阳性扩增条带，则所述中药并不源自牛种动物，也不含有任何牛种源性成分。本发明操作简单、灵敏快速、成本低、能有效鉴定种源性产品的真伪，特别适用于鉴定因深度加工而导致DNA含量极少、片段极短的深度加工型牛皮胶的真伪，适于大规模推广应用。
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公开(公告)号：CN101270357A
公开(公告)日：2008-09-24
申请号：CN200810034447.5
申请日：2008-03-11
申请人： 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
摘要： 本发明提供了一种从深度加工型中药或中药材中提取DNA的方法，包括步骤：a)用消化液对所述深度加工型中药或中药材进行预处理，利用0.5％SDS及蛋白酶K消化，使所述深度加工型中药或中药材中的大量胶原蛋白降解，少量DNA则被完全释放溶解于所述消化液中，获得预处理液；b)采用针对短片段DNA的抽提方法提取所述预处理液中的DNA，该方法快速、简便、可靠、效率高，特别适合因深度加工而导致核酸含量极少、片段极短的胶类中药，获得的DNA能够用于后续常规分子生物学操作，为利用DNA生物学鉴定技术实现胶类中药的鉴别提供基础。
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公开(公告)号：CN101831379B
公开(公告)日：2013-02-06
申请号：CN201010174260.2
申请日：2010-05-13
申请人： 山东东阿阿胶股份有限公司 , 华东理工大学
摘要： 一种有利于rPA大规模复性的高效混合复性装置，用以向复性缓冲液内加入变性蛋白溶液，包括容器，内装所述复性缓冲液；进液管，一端为出液端，所述出液端设有多个喷嘴，另一端为进液端，通以所述变性蛋白溶液；螺旋桨，插入所述复性缓冲液的液面下方。由此，本发明可有效抑制rPA包涵体在复性时的聚集反应，显著提高目的蛋白的复性率。
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公开(公告)号：CN102816819A
公开(公告)日：2012-12-12
申请号：CN201210287424.1
申请日：2012-08-13
申请人： 山东阿华生物药业有限公司 , 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
IPC分类号： C12P21/06
摘要： 本发明公开了一种提高人胰岛素前体融合蛋白酶切转换成B30缺苏氨酸人胰岛素（desB30）产率的方法，包括：（1）将人胰岛素前体融合蛋白表达产物依次采用离子交换和反相层析的方法进行纯化；（2）收集反相层析的洗脱液，加入Tris或NH4HCO3，再加入胰蛋白酶进行酶切转换。本发明利用反相层析对胰岛素前体融合蛋白的离子交换收集液进行再次纯化，达到了去除色素提高胰岛素前体融合蛋白纯度的目的，又将胰岛素前体融合蛋白置换到适宜的有机溶剂的环境中，显著降低了其在水相中产生聚体的现象，酶切转换效率相应的提高了15%以上，这对于以desB30为原料转肽生成原型胰岛素或者地特胰岛素，可以较大幅度的降低生产成本。
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公开(公告)号：CN101265500B
公开(公告)日：2011-01-19
申请号：CN200810034058.2
申请日：2008-02-29
申请人： 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明提供了一种源自真核生物的中药及中药材的PCR鉴定方法，其用根据真核生物基因组SINE序列设计的物种特异性引物，对中药材及中药尤其是深度加工型中药提取的DNA样品进行PCR扩增获得扩增产物，通过对扩增产物分析判断深度加工型中药含有哪些真核生物物种，进而判断检测的样品的真伪，该PCR鉴定方法适用于中药及中药材，特别适合于加工型中药，尤其是因深度加工而导致DNA含量极少、片段极短的中药，操作简单、灵敏快速、成本低、能有效鉴定中药及中药材的真伪。
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