公开(公告)号：CN109486846A

公开(公告)日：2019-03-19

申请号：CN201811642833.2

申请日：2018-12-29

申请人： 山东农业大学

发明人： 朱瑞良 ,  王秋菊 ,  胡莉萍 ,  魏凯 ,  黄河 ,  崔文平 ,  沙洲 ,  徐煜琳 ,  朱琳 ,  楚遵锋

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N15/65 ,  C12N15/66 ,  C12N15/62 ,  C07K19/00 ,  A61K39/10 ,  A61K39/116 ,  A61P31/04 ,  G01N33/569

CPC分类号： C12N15/70 ,  A61K39/098 ,  A61P31/04 ,  C07K14/23 ,  C07K2319/00 ,  C12N15/65 ,  C12N15/66 ,  G01N33/56911

摘要： 本发明公开了一种布鲁氏菌三种基因重组质粒、构建方法及其在大肠杆菌中的表达和应用，属于基因工程技术领域。其技术方案为：所述重组质粒是以pET-28a（+）质粒为载体，在pET-28a（+）限制性酶切位点BamHI和XhoI之间插入合成的Omp10-Omp28-L7/L12基因全长，建成含有Omp10-Omp28-L7/L12基因片段和卡那霉素筛选标签的pET-28a（+）重组质粒，即pET-28a（+）-Omp10-Omp28-L7/L12重组质粒。本发明的有益效果为：本发明成功克隆布鲁氏菌Omp10-Opm28-L7/L12，并连接转化至表达质粒，实现了重组质粒在大肠杆菌表达系统的高效可溶性表达，表达的蛋白能在体液及细胞水平上抑制布鲁氏菌的感染、增殖和迁移能力，并可促进小鼠体内抗体的水平及延长免疫时间，为布鲁氏菌病的治疗提供新的治疗思路。

公开(公告)号：CN109486846B

公开(公告)日：2021-08-20

申请号：CN201811642833.2

申请日：2018-12-29

申请人： 山东农业大学

发明人： 朱瑞良 ,  王秋菊 ,  胡莉萍 ,  曹小安 ,  魏凯 ,  黄河 ,  崔文平 ,  沙洲 ,  徐煜琳 ,  朱琳 ,  楚遵锋

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N15/65 ,  C12N15/66 ,  C12N15/62 ,  C07K19/00 ,  A61K39/10 ,  A61K39/116 ,  A61P31/04 ,  G01N33/569

摘要： 本发明公开了一种布鲁氏菌三种基因重组质粒、构建方法及其在大肠杆菌中的表达和应用，属于基因工程技术领域。其技术方案为：所述重组质粒是以pET‑28a（+）质粒为载体，在pET‑28a（+）限制性酶切位点BamHI和XhoI之间插入合成的Omp10‑Omp28‑L7/L12基因全长，建成含有Omp10‑Omp28‑L7/L12基因片段和卡那霉素筛选标签的pET‑28a（+）重组质粒，即pET‑28a（+）‑Omp10‑Omp28‑L7/L12重组质粒。本发明的有益效果为：本发明成功克隆布鲁氏菌Omp10‑Opm28‑L7/L12，并连接转化至表达质粒，实现了重组质粒在大肠杆菌表达系统的高效可溶性表达，表达的蛋白能在体液及细胞水平上抑制布鲁氏菌的感染、增殖和迁移能力，并可促进小鼠体内抗体的水平及延长免疫时间，为布鲁氏菌病的治疗提供新的治疗思路。