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公开(公告)号：CN114574410A
公开(公告)日：2022-06-03
申请号：CN202210116458.8
申请日：2022-02-07
申请人： 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
摘要： 本发明提供了一种高效生产N‑乙酰氨基葡萄糖的大肠杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明所述重组大肠杆菌以大肠杆菌E.coli ATCC25947(DE3)为出发菌株，过表达具有若干个T7lac启动子控制的gna1基因与具有若干个T7lac启动子控制的glmS基因，并敲除manX基因、manY基因、manZ基因、nagA基因、nagB基因、nagE基因、poxB基因和ldhA基因所得，提高了N‑乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量，其浓度最高可达180g/L，葡萄糖转化率56％，不产生乙酸和乳酸副产物，为进一步代谢工程改造大肠杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113293155A
公开(公告)日：2021-08-24
申请号：CN202110603957.5
申请日：2021-05-31
申请人： 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
摘要： 本发明涉及一种几丁二糖脱乙酰酶突变体，由极端嗜热古菌Pyrococcus horikoshii的几丁二糖脱乙酰酶的第74位的甘氨酸G突变为丙氨酸A得到。本发明提高了几丁二糖脱乙酰酶Dac的酶活、表达量和催化效率，解决了几丁二糖脱乙酰酶Dac转化合成氨基葡萄糖GlcN效率不高的问题。
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公开(公告)号：CN109777761A
公开(公告)日：2019-05-21
申请号：CN201910193636.5
申请日：2019-03-14
申请人： 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
IPC分类号： C12N1/21 , C12N9/80 , C12P19/26 , A61K35/742 , A23L33/135 , C12R1/125
摘要： 本发明公开了一种分泌表达几丁二糖脱乙酰酶的工程菌的构建及其应用，属于发酵工程技术领域。本发明首先构建了一株异源分泌表达几丁二糖脱乙酰酶基因的重组枯草芽孢杆菌，首次在重组载体中加入信号肽片段yncM，该信号肽可以将目的蛋白几丁二糖脱乙酰酶分泌到重组枯草芽孢杆菌的细胞外，并获得了5’端的非翻译区的突变体，显著提高了目标蛋白的表达量，极大简化了后续酶分离纯化的步骤。获得的几丁二糖脱乙酰酶，以发酵培养基发酵培养50-60h时酶活达到最高为1548.7U/mL，几丁二糖脱乙酰酶产量最高约为620mg/L。同时，该方法具有低生产成本、生产条件温和、纯化工艺步骤简单、生产操作安全等优点。
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公开(公告)号：CN114574410B
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202210116458.8
申请日：2022-02-07
申请人： 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
摘要： 本发明提供了一种高效生产N‑乙酰氨基葡萄糖的大肠杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明所述重组大肠杆菌以大肠杆菌E.coli ATCC25947(DE3)为出发菌株，过表达具有若干个T7lac启动子控制的gna1基因与具有若干个T7lac启动子控制的glmS基因，并敲除manX基因、manY基因、manZ基因、nagA基因、nagB基因、nagE基因、poxB基因和ldhA基因所得，提高了N‑乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量，其浓度最高可达180g/L，葡萄糖转化率56％，不产生乙酸和乳酸副产物，为进一步代谢工程改造大肠杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。
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公开(公告)号：CN107653274A
公开(公告)日：2018-02-02
申请号：CN201711069552.8
申请日：2017-11-03
申请人： 山东润德生物科技有限公司 , 新泰市佑德生物化工研究院有限公司
IPC分类号： C12P13/00 , G01N21/359
CPC分类号： C12P13/001 , G01N21/359
摘要： 本发明公开了一种基于近红外光谱快速测定的氨基葡萄糖发酵补料控制方法，包括采用大肠杆菌基因工程菌发酵生产氨基葡萄糖，发酵过程中，采用近红外光谱分析方法实时在线检测发酵液的OD600nm值，当OD600nm=20～30时，开始补糖，采用近红外光谱分析方法实时在线检测并控制葡萄糖底物浓度≤0.20g/L，采用近红外光谱分析方法实时在线检测并控制pH值在6.75～6.95，控制补糖速率：OD600nm值每小时的增加量为1.5～3，至发酵结束。本发明的方法，建立了OD、残糖浓度、产物浓度等关键控制参数之间的关系，确定了氨基葡萄糖发酵补糖依据或关键因子，建立了氨基葡萄糖的发酵补料工艺方法，氨基葡萄糖发酵生产水平和产品质量得到明显提升。
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公开(公告)号：CN112961850B
公开(公告)日：2022-11-18
申请号：CN202110160901.7
申请日：2021-02-05
申请人： 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
摘要： 本发明公开了一种高效分泌表达几丁二糖脱乙酰酶的枯草芽孢杆菌及其应用，本发明通过对几丁二糖脱乙酰酶Dac的分子结构及表达载体pP43mut‑N1‑yncM‑Dac的RBS序列进行改造，提高几丁二糖脱乙酰酶Dac的催化速率及翻译表达速率，提高酶活，并构建了可以高产氨基葡萄糖GlcN的枯草芽孢杆菌。与现有技术相比，几丁二糖脱乙酰酶胞外酶活可达3769.5U/mL。本转化方法条件温和，对环境污染小，而且底物选择性高，目标产物专一，反应速率快，产物得率高。此法有利于解决化学合成法中污染严重，步骤繁琐等问题，而且工艺简单，易于控制，方便推广应用。
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公开(公告)号：CN106831895B
公开(公告)日：2019-11-01
申请号：CN201710038401.X
申请日：2017-01-19
申请人： 山东润德生物科技有限公司
摘要： 本发明提供了一种纯化N‑乙酰氨基葡萄糖的方法，包括：加入活性炭对料液进行脱色处理；其中，料液中包括N‑乙酰氨基葡萄糖；对脱色后的料液进行过滤处理，得到的滤液通过电渗析法脱盐除杂，除去盐离子以及带有电荷的有机物，包括蛋白及氨基酸；将脱盐后的溶液45‑60℃真空浓缩至溶液饱和；向浓缩后的溶液中加入10％‑50％体积的乙醇，降温至20‑25℃，结晶8‑12h，经过过滤或离心得到晶体物料；将得到的晶体物料加入到无水乙醇溶液中进行醇洗后，过滤或离心得到白色固体物料；将得到的白色固体物料在50‑80℃条件下干燥3‑5h，得到纯白色纯化N‑乙酰氨基葡萄糖。本发明采用电渗析法脱盐除杂，收率高，纯度高，能耗低，对料液适应性强，操作简单易于实现自动化，节水效率高。
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公开(公告)号：CN106479945A
公开(公告)日：2017-03-08
申请号：CN201511022766.0
申请日：2015-12-29
申请人： 山东润德生物科技有限公司
摘要： 本发明公开了一种提高乙酰氨基葡萄糖胞外分泌量的重组枯草芽孢杆菌，属于遗传工程领域。本发明是以重组枯草芽孢杆菌BSGN6-PxylA-glmS作为出发菌株，通过过量表达来源于白色念珠菌(Candida albicans SC5314)的氨基葡萄糖乙酰化酶编码基因(CaGNA1)或者同时敲除非必需区域skin，加强氨糖合成途径，得到了积累乙酰氨基葡萄糖枯草芽孢杆菌基因工程菌，比过表达酿酒酵母来源的CaGNA1的基因工程菌提高了21％或94％，为进一步代谢工程改造枯草芽孢杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113355310A
公开(公告)日：2021-09-07
申请号：CN202110601441.7
申请日：2021-05-31
申请人： 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
摘要： 本发明涉及一种最适pH降低的几丁二糖脱乙酰酶组合突变体，通过分子模型和计算机分析预测几丁二糖脱乙酰酶表面电荷及酶活相关位点，再通过定点突变技术构建相关位点的突变体，筛选出不同位点突变时最适pH、酶活以及产物GlcN稳定性均较优的单突变体，构建其组合突变体，得到最适pH下降至6.0，酶活明显提高的组合突变体。
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公开(公告)号：CN111214956A
公开(公告)日：2020-06-02
申请号：CN202010040566.2
申请日：2020-01-15
申请人： 山东润德生物科技有限公司
摘要： 本发明公开了旋转膜固液分离设备，涉及葡萄糖固液分离技术领域。该旋转膜固液分离设备，包括反应器，反应器为圆柱体，且反应器的内部为中空结构，反应器的下方设置有反应台，反应台为矩形的板，反应器的下壁面固定连接在反应台的上壁面上，反应台的下方设置有四个支撑腿，四个支撑腿为圆柱的杆，四个支撑腿的上壁面均固定连接在反应台下壁面四个拐角处，反应器的上方设置有盖帽，盖帽为横截面为T形的盖，盖帽的垂直处外圆柱上开设有外螺纹，本发明通过设置下转盘与上转盘，下转盘与上转盘之间固液混合物在反应器系统内部不断地形成湍流，带来的壁面剪切力比传统错流提高入料孔50％，更好的抑制滤饼侧的堆积，防止污堵，促进过滤效率。
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