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公开(公告)号：CN118389599B
公开(公告)日：2024-10-18
申请号：CN202410832652.5
申请日：2024-06-26
Applicant: 广东省农业科学院动物科学研究所
IPC: C12N15/86 , C12N15/12 , C12N9/22 , C12N15/113 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种利用鸡全基因组CRISPR高通量技术筛选呕吐毒素抗性基因的方法。属于动物育种技术领域。本发明先获得了稳定表达Cas9蛋白的DF‑1细胞系。随后构建鸡全基因组sgRNA文库质粒并将其包装成慢病毒感染DF‑1‑Cas9细胞系，利用流式细胞术获得敲除细胞库。以呕吐毒素为模型攻毒敲除细胞库，收集存活细胞并扩大培养，提取细胞基因组信息进行高通量测序，再使用MAGeCK软件进行差异分析，最后构建单基因敲除细胞系验证抗性基因。本发明构建了鸡全基因组敲除文库筛选技术，成功筛选到呕吐毒素抗性基因，对禽细胞建立全基因组CRISPR敲除细胞库的流程提供参考意义，为鸡功能基因的高通量筛选奠定基础。
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公开(公告)号：CN116286612A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310325808.6
申请日：2023-03-30
Applicant: 广东省农业科学院动物科学研究所
IPC: C12N5/0735
Abstract: 本发明公开了一种以mTOR、SMAD信号通路和p53基因为靶点在提高鸡PGCs体外建系效率中的应用，属于鸡原始生殖细胞体外建系技术领域，本发明发现mTOR、SMAD信号通路和p53基因与鸡PGCs体外建系效率相关，并以此为基础开发了组合物，可以显著提高鸡PGCs的体外建系效率。
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公开(公告)号：CN112522315B
公开(公告)日：2023-04-11
申请号：CN202011445596.8
申请日：2020-12-08
Applicant: 广东省农业科学院动物科学研究所
IPC: C12N15/85 , C12N15/65 , C12N5/0735 , C12N5/071
Abstract: 本发明公开了一种鸡原始生殖细胞转染方法。属于细胞转染技术领域。包括：鸡原始生殖细胞的分离培养；转染，转染前细胞呈圆形、边缘光亮，直径11～13μm，部分细胞2～4个连在一起；质粒、转染试剂和鸡原始生殖细胞细胞数的配比为(1.5～3μg):(2～4μL):(103～104个)；转染时细胞2～3层，最上层汇合度接近100％；转染培养基为有血清有双抗完全培养基；转染时间5～12h；转染试剂为Lipofectamine 3000。本发明的有益效果为：转染效率达到了23.4％。为家禽基因组编辑技术的应用奠定基础。
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公开(公告)号：CN118932086A
公开(公告)日：2024-11-12
申请号：CN202411299320.1
申请日：2024-09-18
Applicant: 广东省农业科学院动物科学研究所 , 四川大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/686
Abstract: 本发明公开了一种血液直接PCR鉴定基因修饰鸡的方法。属于PCR鉴定技术领域。本发明方法包括如下步骤：采集鸡血加入含有EDTA的离心管中，得预处理液；离心弃上清，之后加入纯水、充分震荡，静置后吸上清作为模板；进行PCR反应。本申请直接采集鸡脚趾血进行PCR鉴定，血液采集方法简单，不需要抽提DNA，降低了成本，且大大减少了工作量。
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公开(公告)号：CN117487743B
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202311814094.1
申请日：2023-12-27
Applicant: 广东省农业科学院动物科学研究所
Abstract: 本发明公开了一种诱导鸡胚成纤维细胞为鸡多能干细胞的化学诱导剂及诱导方法。属于多能干细胞制备技术领域。该化学诱导剂包括XAV‑939、Y‑27632、Resveratrol、SF1670、CHIR‑99021、Menthone、β‑Alanine和Ferrostatin‑1。本发明利用小分子化合物诱导鸡胚成纤维细胞，以期在短时间内获得大量鸡iPSC，为其进行离体保种、基因编辑研究等奠定良好基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117467599B
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202311814122.X
申请日：2023-12-27
Applicant: 广东省农业科学院动物科学研究所
Abstract: 本发明公开了一种重编程鸡性腺体细胞为鸡多能干细胞的化学诱导剂及重编程方法。属于多能干细胞制备技术领域。该化学诱导剂包括Y‑27632、Resveratrol、SF1670、CHIR‑99021、Menthone、β‑Alanine和p53抑制剂。本发明利用小分子化合物重编程鸡性腺体细胞，以期在短时间内获得大量鸡iPSC，为其进行离体保种、基因编辑研究等奠定良好基础。
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公开(公告)号：CN117467599A
公开(公告)日：2024-01-30
申请号：CN202311814122.X
申请日：2023-12-27
Applicant: 广东省农业科学院动物科学研究所
Abstract: 本发明公开了一种重编程鸡性腺体细胞为鸡多能干细胞的化学诱导剂及重编程方法。属于多能干细胞制备技术领域。该化学诱导剂包括Y‑27632、Resveratrol、SF1670、CHIR‑99021、Menthone、β‑Alanine和p53抑制剂。本发明利用小分子化合物重编程鸡性腺体细胞，以期在短时间内获得大量鸡iPSC，为其进行离体保种、基因编辑研究等奠定良好基础。
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公开(公告)号：CN116286612B
公开(公告)日：2023-10-20
申请号：CN202310325808.6
申请日：2023-03-30
Applicant: 广东省农业科学院动物科学研究所
IPC: C12N5/0735
Abstract: 本发明公开了一种以mTOR、SMAD信号通路和p53基因为靶点在提高鸡PGCs体外建系效率中的应用，属于鸡原始生殖细胞体外建系技术领域，本发明发现mTOR、SMAD信号通路和p53基因与鸡PGCs体外建系效率相关，并以此为基础开发了组合物，可以显著提高鸡PGCs的体外建系效率。
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公开(公告)号：CN119799797A
公开(公告)日：2025-04-11
申请号：CN202510106048.9
申请日：2025-01-23
Applicant: 广东省农业科学院动物科学研究所 , 广东温氏南方家禽育种有限公司
Abstract: 本发明公开了一种鸡原始生殖细胞的电转染方法。属于生物技术领域。该方法包括如下步骤：(1)鸡原始生殖细胞的培养及计数；(2)将计数之后的鸡原始生殖细胞与电转缓冲液、待转染材料混合，得到电转染体系；所述待转染材料为miRNA抑制剂、miRNA模拟物或DNA；(3)将电转染体系转移至电极杯中，使用电转仪进行转染。与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：本发明方法能够使miRNA抑制剂、miRNA模拟物或载体DNA在原始生殖细胞中成功表达，且表达量显著提高，有助于研究原始生殖细胞自我更新、增殖等特性，满足体外细胞实验以及实施基因编辑技术的要求。
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公开(公告)号：CN118389599A
公开(公告)日：2024-07-26
申请号：CN202410832652.5
申请日：2024-06-26
Applicant: 广东省农业科学院动物科学研究所
IPC: C12N15/86 , C12N15/12 , C12N9/22 , C12N15/113 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种利用鸡全基因组CRISPR高通量技术筛选呕吐毒素抗性基因的方法。属于动物育种技术领域。本发明先获得了稳定表达Cas9蛋白的DF‑1细胞系。随后构建鸡全基因组sgRNA文库质粒并将其包装成慢病毒感染DF‑1‑Cas9细胞系，利用流式细胞术获得敲除细胞库。以呕吐毒素为模型攻毒敲除细胞库，收集存活细胞并扩大培养，提取细胞基因组信息进行高通量测序，再使用MAGeCK软件进行差异分析，最后构建单基因敲除细胞系验证抗性基因。本发明构建了鸡全基因组敲除文库筛选技术，成功筛选到呕吐毒素抗性基因，对禽细胞建立全基因组CRISPR敲除细胞库的流程提供参考意义，为鸡功能基因的高通量筛选奠定基础。
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