公开(公告)号：CN106893732A

公开(公告)日：2017-06-27

申请号：CN201710251311.9

申请日：2017-04-18

申请人： 扬州大学

发明人： 王建业 ,  凌珏怡 ,  朱国强 ,  黄钰 ,  王志仙 ,  孟霞 ,  朱礼倩

IPC分类号： C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  C12N15/65

CPC分类号： C12N15/63 ,  C12N15/65 ,  C12N15/66

摘要： 本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)感染性克隆的拯救方法。该方法是将GPV的完整基因组克隆入载体质粒pBSKNB，获得重组质粒；将重组质粒与转染试剂混合后，通过绒毛尿囊膜途径接种非免疫鹅胚，重组质粒在鹅胚中得到拯救；所述pBSKNB载体，是将pBluescript II(SK)质粒上原有的EcoRV和HindIII酶切位点分别用NcoI和BclI位点替换而得到。本发明产生的感染性病毒可致死鹅胚，拯救病毒与亲本病毒具有一致生物学特性。该拯救方法操作简便高效，避免了转染细胞带来的繁琐和低效问题，在GPV反向遗传学研究和疫苗创制上具有潜在应用价值。

公开(公告)号：CN107012170A

公开(公告)日：2017-08-04

申请号：CN201710299948.5

申请日：2017-05-02

申请人： 扬州大学

发明人： 王建业 ,  黄钰 ,  王志仙 ,  凌珏怡 ,  朱国强 ,  孟霞 ,  朱礼倩

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  C12N7/00

CPC分类号： C12N15/85 ,  C12N7/00 ,  C12N15/66 ,  C12N2750/14352 ,  C12N2800/106

摘要： 本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)感染性克隆的构建和拯救方法。该方法是将MDPV的完整基因组克隆入载体质粒pBSKN，获得重组质粒；将重组质粒与转染试剂混合后，通过绒毛尿囊膜途径接种非免疫番鸭胚，重组质粒在番鸭胚中得到拯救；所述pBSKN载体，是将商品化质粒pBluescript II(SK)多克隆位点原有的EcoRV酶切位点用NcoI位点替换而得到。产生的感染性病毒可致死番鸭胚，拯救病毒与亲本病毒对雏番鸭具有相近的致死率。该拯救方法操作简便高效，避免了转染原代细胞带来的繁琐和低效问题，在MDPV反向遗传学研究和疫苗创制上具有潜在应用价值。