公开(公告)号：CN118931874A

公开(公告)日：2024-11-12

申请号：CN202411100911.1

申请日：2024-08-12

申请人： 江南大学

发明人： 史劲松 ,  张鹏 ,  龚劲松 ,  孔晓丽 ,  苏畅 ,  李恒 ,  许正宏

IPC分类号： C12N9/16 ,  C12N15/75 ,  C12N15/63 ,  C12N15/55 ,  C12N1/21 ,  C12P7/6481 ,  C12R1/125

摘要： 本发明涉及一种高效表达磷脂酶D的方法及应用，属于基因工程技术领域。本发明通过表达元件共优化策略，实现了磷脂酶D的高效分泌表达，胞外酶活达到4055.9U/mL，相较于未改造菌株，酶活提高了43.6倍。本发明还根据此表达体系，通过整合位点筛选和多拷贝整合策略，首次实现了磷脂酶D的整合表达，整合菌株胞外酶活达到392.9U/mL。本发明的磷脂酶D具有良好的催化活性，能在水相条件下以大豆卵磷脂为底物高效合成磷脂酸。重组菌株酶活稳定性好、发酵周期短、催化效率高，为大规模工业化生产奠定了基础，表明该菌株在磷脂类衍生物的生物合成领域具有潜在应用价值。同时，整合菌株避免了发酵过程中抗生素的添加，拓宽了菌株的应用范围。