公开(公告)号：CN106434594B

公开(公告)日：2019-09-10

申请号：CN201610979843.X

申请日：2016-11-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 徐美娟 ,  饶志明 ,  张景景 ,  杨套伟 ,  张显 ,  葛小勋

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N1/21 ,  C12P13/10 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明提供了一种既解除了L‑精氨酸对其的反馈抑制作用又显著提高了催化活性与热稳定性的N‑乙酰谷氨酸激酶突变体，属于生物工程领域。首先采用分子对接技术和对来源于钝齿棒杆菌CGMCC NO:0890的N‑乙酰谷氨酸激酶(CcNAGK)的结构分析，确定了E19位点对精氨酸的反馈抑制具有重要作用和位于底物结合口袋的三个关键氨基酸残基位点I74、F91与K234对酶的催化活性与热稳定性有着重大影响。然后，对其编码的氨基酸进行取代，将复合突变后基因argB4通过pDXW10引入高产精氨酸的钝齿棒杆菌中，可显著提高了钝齿棒杆菌中精氨酸的合成速率。最终在5L发酵罐中发酵96h后精氨酸产量由原来的43.2g/L提高至61.2g/L，L‑精氨酸产量提高了41.8％。

公开(公告)号：CN105907735A

公开(公告)日：2016-08-31

申请号：CN201610286036.X

申请日：2016-05-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  徐美娟 ,  张景景 ,  杨套伟 ,  张显 ,  葛小勋

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N15/77 ,  C12P13/10

CPC classification number: C12N9/1217 ,  C12P13/10 ,  C12Y207/02008

Abstract: 本发明公开了一种催化效率与热稳定性提高的N?乙酰谷氨酸激酶突变体，属于生物工程领域。将来源于钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum SYPA5?5)的N?乙酰谷氨酸激酶的基因进行定点突变，使其编码的氨基酸序列在第91位由苯丙氨酸F突变为组氨酸H。本发明所述的N?乙酰谷氨酸激酶突变体的催化效率是野生型的2.12倍，在37℃下的半衰期是突变前的2.78倍。本发明所得N?乙酰谷氨酸激酶突变体更有利于精氨酸的生产需求，为高效合成L?精氨酸奠定了基础。

公开(公告)号：CN105838689A

公开(公告)日：2016-08-10

申请号：CN201610285765.3

申请日：2016-05-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  徐美娟 ,  张景景 ,  杨套伟 ,  张显 ,  葛小勋

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54

CPC classification number: C12N9/1217 ,  C12Y207/02008

Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的N?乙酰谷氨酸激酶突变体，属于生物工程领域。将来源于钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum SYPA5?5)的N?乙酰谷氨酸激酶的基因进行定点突变，使其编码的氨基酸序列在第74位由异亮氨酸I突变为缬氨酸V。本发明所述的N?乙酰谷氨酸激酶突变体的催化效率(Kcat/Km)由野生型的513mM?1min?1提高到843mM?1min?1，是突变之前的1.64倍，并且此突变体的热稳定性也有所提高。本发明所得N?乙酰谷氨酸激酶突变体更有利于精氨酸的生产需求，为高效合成L?精氨酸奠定了基础。

公开(公告)号：CN106434594A

公开(公告)日：2017-02-22

申请号：CN201610979843.X

申请日：2016-11-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 徐美娟 ,  饶志明 ,  张景景 ,  杨套伟 ,  张显 ,  葛小勋

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N1/21 ,  C12P13/10 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明提供了一种既解除了L-精氨酸对其的反馈抑制作用又显著提高了催化活性与热稳定性的N-乙酰谷氨酸激酶突变体，属于生物工程领域。首先采用分子对接技术和对来源于钝齿棒杆菌CGMCC NO:0890的N-乙酰谷氨酸激酶(CcNAGK)的结构分析，确定了E19位点对精氨酸的反馈抑制具有重要作用和位于底物结合口袋的三个关键氨基酸残基位点I74、F91与K234对酶的催化活性与热稳定性有着重大影响。然后，对其编码的氨基酸进行取代，将复合突变后基因argB4通过pDXW10引入高产精氨酸的钝齿棒杆菌中，可显著提高了钝齿棒杆菌中精氨酸的合成速率。最终在5L发酵罐中发酵96h后精氨酸产量由原来的43.2g/L提高至61.2g/L，L-精氨酸产量提高了41.8％。

公开(公告)号：CN105907735B

公开(公告)日：2019-07-30

申请号：CN201610286036.X

申请日：2016-05-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  徐美娟 ,  张景景 ,  杨套伟 ,  张显 ,  葛小勋

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N15/77 ,  C12P13/10

Abstract: 本发明公开了一种催化效率与热稳定性提高的N‑乙酰谷氨酸激酶突变体，属于生物工程领域。将来源于钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum SYPA5‑5)的N‑乙酰谷氨酸激酶的基因进行定点突变，使其编码的氨基酸序列在第91位由苯丙氨酸F突变为组氨酸H。本发明所述的N‑乙酰谷氨酸激酶突变体的催化效率是野生型的2.12倍，在37℃下的半衰期是突变前的2.78倍。本发明所得N‑乙酰谷氨酸激酶突变体更有利于精氨酸的生产需求，为高效合成L‑精氨酸奠定了基础。

公开(公告)号：CN105838689B

公开(公告)日：2019-05-21

申请号：CN201610285765.3

申请日：2016-05-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  徐美娟 ,  张景景 ,  杨套伟 ,  张显 ,  葛小勋

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54

Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的N‑乙酰谷氨酸激酶突变体，属于生物工程领域。将来源于钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum SYPA5‑5)的N‑乙酰谷氨酸激酶的基因进行定点突变，使其编码的氨基酸序列在第74位由异亮氨酸I突变为缬氨酸V。本发明所述的N‑乙酰谷氨酸激酶突变体的催化效率(Kcat/Km)由野生型的513mM‑1min‑1提高到843mM‑1min‑1，是突变之前的1.64倍，并且此突变体的热稳定性也有所提高。本发明所得N‑乙酰谷氨酸激酶突变体更有利于精氨酸的生产需求，为高效合成L‑精氨酸奠定了基础。

公开(公告)号：CN105838690B

公开(公告)日：2019-05-17

申请号：CN201610291241.5

申请日：2016-05-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  徐美娟 ,  张景景 ,  杨套伟 ,  张显 ,  陈肖峰

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N15/77

Abstract: 本发明公开了一种热稳定性显著提高的N‑乙酰谷氨酸激酶突变体，属于生物工程领域。将来源于钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum SYPA5‑5)的N‑乙酰谷氨酸激酶的基因进行定点突变，使其编码的氨基酸序列在第234位赖氨酸K突变为苏氨酸T。本发明所述的N‑乙酰谷氨酸激酶突变体在37℃下的半衰期由野生型的36h延长到112h，是突变前的3.11倍。本发明所得N‑乙酰谷氨酸激酶突变体更有利于精氨酸的生产需求，为高效合成L‑精氨酸奠定了基础。

公开(公告)号：CN105838690A

公开(公告)日：2016-08-10

申请号：CN201610291241.5

申请日：2016-05-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  徐美娟 ,  张景景 ,  杨套伟 ,  张显 ,  陈肖峰

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N15/77

CPC classification number: C12N9/1217 ,  C12Y207/02008

Abstract: 本发明公开了一种热稳定性显著提高的N?乙酰谷氨酸激酶突变体，属于生物工程领域。将来源于钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum SYPA5?5)的N?乙酰谷氨酸激酶的基因进行定点突变，使其编码的氨基酸序列在第234位赖氨酸K突变为苏氨酸T。本发明所述的N?乙酰谷氨酸激酶突变体在37℃下的半衰期由野生型的36h延长到112h，是突变前的3.11倍。本发明所得N?乙酰谷氨酸激酶突变体更有利于精氨酸的生产需求，为高效合成L?精氨酸奠定了基础。