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公开(公告)号：CN105062997A
公开(公告)日：2015-11-18
申请号：CN201510526470.6
申请日：2015-08-25
申请人： 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所 , 如皋江大食品生物技术研究所有限公司
摘要： 本发明公开了一种酶活提高的L-天冬酰胺酶突变体及其构建方法，属于基因工程领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.2所示的氨基酸的基础上，将第107位甘氨酸突变成天冬氨酸。本发明得到的突变体在枯草芽孢杆菌中表达，摇瓶发酵24h后酶活为961U/mL，突变酶活提高了80％，底物亲和力较原始酶降低50％，催化效率提高84％，同时比酶活提高83％。本发明表明107位氨基酸残基对酶的催化作用有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN105062941A
公开(公告)日：2015-11-18
申请号：CN201510526416.1
申请日：2015-08-25
申请人： 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所 , 如皋江大食品生物技术研究所有限公司
摘要： 本发明公开了一种利用重组枯草芽孢杆菌全细胞转化生产L-鸟氨酸的方法，属于生物工程和生物技术领域。本发明将来源于Bacillus cereus的精氨酸酶成功在Bacillus subtilis 168中表达。酶活测定结果表明，重组工程菌的精氨酸酶酶活比原始菌提高了近27倍。以此工程菌作为生物催化剂，以L-精氨酸作为底物，进行转化法生产L-鸟氨酸，采用分批补加底物L-精氨酸的方法在5-L发酵中进行转化法生产L-鸟氨酸。12h后可以得到378.9g/L的L-鸟氨酸，底物L-精氨酸的摩尔转化率达到99.9％。本发明方法生产L-鸟氨酸具有效率高，专一性强，能耗低等优点。
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公开(公告)号：CN105154456B
公开(公告)日：2018-05-01
申请号：CN201510524310.8
申请日：2015-08-24
申请人： 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所
摘要： 2,3‑丁二醇的合成最后一步是乙偶姻还原酶催化还原乙偶姻合成2,3‑丁二醇，此反应需要还原型辅酶NADH的参与，因此，胞内辅酶NADH水平的高低是影响乙偶姻向2,3‑丁二醇转化程度的一个重要因素。为进一步提高该菌株2,3‑丁二醇合成能力，并减少副产物乙偶姻的积累，发明人将HpaII‑fdh片段插入到基因nox内部，获得片段nox::HpaII‑fdh，并将该片段导入解淀粉芽孢杆菌B10‑127中，通过同源重组原理获得染色体组上基因nox内部被fdh基因插入的重组解淀粉芽孢杆菌(重新命名为N△F)。并对原始菌及重组菌N△F进行2,3‑丁二醇发酵性能检测，结果表明，与原始菌株相比，重组菌2,3‑丁二醇产量提高了18.9％，副产物乙偶姻产量降低70.8％。说明该策略能够提高2,3‑丁二醇产量，降低副产物乙偶姻的积累。
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公开(公告)号：CN105154456A
公开(公告)日：2015-12-16
申请号：CN201510524310.8
申请日：2015-08-24
申请人： 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所 , 如皋江大食品生物技术研究所有限公司
摘要： 2,3-丁二醇的合成最后一步是乙偶姻还原酶催化还原乙偶姻合成2,3-丁二醇，此反应需要还原型辅酶NADH的参与，因此，胞内辅酶NADH水平的高低是影响乙偶姻向2,3-丁二醇转化程度的一个重要因素。为进一步提高该菌株2,3-丁二醇合成能力，并减少副产物乙偶姻的积累，发明人将HpaII-fdh片段插入到基因nox内部，获得片段nox::HpaII-fdh，并将该片段导入解淀粉芽孢杆菌B10-127中，通过同源重组原理获得染色体组上基因nox内部被fdh基因插入的重组解淀粉芽孢杆菌(重新命名为N△F)。并对原始菌及重组菌N△F进行2,3-丁二醇发酵性能检测，结果表明，与原始菌株相比，重组菌2,3-丁二醇产量提高了18.9％，副产物乙偶姻产量降低70.8％。说明该策略能够提高2,3-丁二醇产量，降低副产物乙偶姻的积累。
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公开(公告)号：CN105087628A
公开(公告)日：2015-11-25
申请号：CN201510526225.5
申请日：2015-08-25
申请人： 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所 , 如皋江大食品生物技术研究所有限公司
摘要： 通过大肠杆菌和钝齿棒杆菌之间的穿梭质粒pXMJ19，将来源于Bacillus cereus的精氨酸酶成功在C.crenatum SDNN403中表达。酶活测定结果表明，原始菌不具有精氨酸酶的活性，而重组工程菌的精氨酸酶酶活达到24.3U/mg。以此工程菌全细胞菌体作为生物催化剂，以L-精氨酸作为底物，同时基于精氨酸酶酶学性质，确定了最佳的反应温度为40℃和pH为9.0。将200ml LBG培养的重组菌菌体重新悬浮于200ml的底物缓冲液中，在最佳的转化条件下进行转化法生产L-鸟氨酸。8h后可以得到149.2g/L的L-鸟氨酸，底物L-精氨酸的摩尔转化率达到99.5％。本发明方法生产L-鸟氨酸具有效率高，专一性强，能耗低等优点。
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公开(公告)号：CN105112437A
公开(公告)日：2015-12-02
申请号：CN201510529068.3
申请日：2015-08-25
申请人： 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所 , 如皋江大食品生物技术研究所有限公司
摘要： 通过大肠杆菌和钝齿棒杆菌之间的穿梭质粒pXMJ19，将来源于Bacillus cereus的精氨酸酶成功在精氨酸高产菌株C.crenatum SDNN403中表达。酶活测定结果表明，原始菌不具有精氨酸酶的活性，而重组工程菌的精氨酸酶酶活达到24.3U/mg。基于此工程菌株具有高产精氨酸和精氨酸酶的特性，研究了其以葡萄糖为底物，采用一步发酵法生产L-鸟氨酸。采用了发酵过程双阶段pH调控的策略，重组菌在第一阶段的在96h发酵过程中，共积累25.05g/L的L-精氨酸和9.86g/L的L-鸟氨酸。经过第二个阶段的发酵后，最终在108h内，共积累27.91g/L的L-鸟氨酸，而精氨酸的含量仅为0.95g/L。本发明方法生产L-鸟氨酸具有效率高，L-精氨酸和其他杂酸余量低，对于后期产物L-鸟氨酸的分离纯化更加容易。
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公开(公告)号：CN105176941A
公开(公告)日：2015-12-23
申请号：CN201510522272.2
申请日：2015-08-24
申请人： 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所 , 如皋江大食品生物技术研究所有限公司
CPC分类号： C12N9/0006
摘要： 一种来源于钝齿棒杆菌中的2,3-丁二醇脱氢酶(乙偶姻还原酶)的鉴定，属于基因工程和酶工程领域。本发明提供了一种2,3-丁二醇脱氢酶，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1，本发明通过表达载体pET-28a(+)，实现2,3-丁二醇脱氢酶基因在大肠杆菌E.coli BL21中进行表达，结果表明重组大肠杆菌中2,3-丁二醇脱氢酶还原方向的比酶活为0.44U/mg，氧化方向的比酶活为0.07U/mg。
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公开(公告)号：CN105062998A
公开(公告)日：2015-11-18
申请号：CN201510528335.5
申请日：2015-08-25
申请人： 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所 , 如皋江大食品生物技术研究所有限公司
CPC分类号： C12N9/82 , C12Y305/01001
摘要： 本发明公开了一种酶活提高的L-天冬酰胺酶突变体及其构建方法，属于基因工程领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.2所示的氨基酸的基础上，将第166位丝氨酸突变成丙氨酸。本发明得到的突变体在枯草芽孢杆菌中表达，摇瓶发酵24h后酶活为657.1U/mL，突变酶活提高了23％，底物亲和力较原始酶降低20％，催化效率提高8.4％，同时比酶活提高25％。本发明表明166位氨基酸残基对酶的催化作用有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN105177034A
公开(公告)日：2015-12-23
申请号：CN201510522274.1
申请日：2015-08-24
申请人： 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所 , 如皋江大食品生物技术研究所有限公司
摘要： 本发明从Bacillus subtilis CTCC M2009200中克隆出参与2,3-丁二醇合成途径中辅酶循环再生的关键酶基因甘油脱氢酶(gdh)和乙偶姻还原酶(acr)以及调控2,3-丁二醇支路关键酶酶活的调控因子aslR，并将该基因与穿梭表达质粒pMA5-HpaII连接，成功构建了携带基因gdh,acr和aslR基因的穿梭表达质粒pMA5-HpaII-acr-HapII-gdh-PbdhA-alsR，并转入Bacillus subtilis CTCC M2009200中，获得加强gdh,acr和alsR基因表达的重组枯草芽孢杆菌(命名为GAR)。对原始菌以及重组菌GAR进行利用甘油发酵生产2,3-丁二醇实验，结果表明，与原始菌株相比，重组菌2,3-丁二醇产量提高了17.2％，副产物如乙偶姻、乳酸和丁二酸的积累分别降低69.2％、45.2％和47.4％，且发酵周期有所缩短。通过补料流加甘油，发酵48h，发酵液中2,3-丁二醇积累量达到102.6g/L，这是现有技术所不能达到的结果。
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公开(公告)号：CN118581058A
公开(公告)日：2024-09-03
申请号：CN202410629904.4
申请日：2024-05-21
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及一种微生物转化廉价底物生产S‑腺苷蛋氨酸的方法，属于工业微生物领域。本发明以Escherichia coliBL21(DE3)为底盘细胞，通过理性设计对S‑腺苷蛋氨酸合成酶(MAT)进行改造，得到双突变体MATI195V/S150A。其比酶活相对与野生株提高176％。同时，通过引入ATP再生途径，实现胞内ATP高效供给供给，构建一株产SAM的大肠杆菌重组菌，并对其进行全细胞转化，使最终SAM产量达到13.6g/L，达到以廉价底物高效生产SAM的目的，具有重要的工业应用前景。
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