公开(公告)号：CN103266161A

公开(公告)日：2013-08-28

申请号：CN201310196282.2

申请日：2013-05-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  许正宏 ,  张温清 ,  邵明龙 ,  徐美娟 ,  张显 ,  李会

IPC: C12P33/02 ,  C12R1/125

Abstract: 重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis产ADD的高产发酵策略。通过单因子实验和正交实验，优化了重组菌Bacillus subtilis168/pMA5-ksdD的发酵培养基组分、培养条件及全细胞转化工艺。确定最优培养基中麦芽糖、大豆蛋白胨∶酵母膏(2∶1)、氯化铵、氯化钾、玉米浆、助溶剂甲基-β-环糊精和底物AD的浓度及pH；确定最佳接种量及培养条件。优化后ADD产量达1.80g/L，较优化前的0.65g/L大幅度提高177％。本发明通过对该重组菌发酵策略的研究，使其全细胞转化AD产ADD的能力获得了较大幅度的提高，为工业微生物一步发酵法高产ADD提供了一种可行的发酵策略。

公开(公告)号：CN103266161B

公开(公告)日：2014-10-15

申请号：CN201310196282.2

申请日：2013-05-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  许正宏 ,  张温清 ,  邵明龙 ,  徐美娟 ,  张显 ,  李会

IPC: C12P33/02 ,  C12R1/125

Abstract: 重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis产ADD的高产发酵策略。通过单因子实验和正交实验，优化了重组菌Bacillus subtilis168/pMA5-ksdD的发酵培养基组分、培养条件及全细胞转化工艺。确定最优培养基中麦芽糖、大豆蛋白胨∶酵母膏(2∶1)、氯化铵、氯化钾、玉米浆、助溶剂甲基-β-环糊精和底物AD的浓度及pH；确定最佳接种量及培养条件。优化后ADD产量达1.80g/L，较优化前的0.65g/L大幅度提高177％。本发明通过对该重组菌发酵策略的研究，使其全细胞转化AD产ADD的能力获得了较大幅度的提高，为工业微生物一步发酵法高产ADD提供了一种可行的发酵策略。

公开(公告)号：CN102703494A

公开(公告)日：2012-10-03

申请号：CN201210210431.1

申请日：2012-06-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  许正宏 ,  张温清 ,  邵明龙 ,  徐美娟 ,  张显 ,  李会

IPC: C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12P33/02 ,  C12R1/32 ,  C12R1/125

Abstract: 一种利用重组Bacillus subtilis全细胞转化AD生成ADD的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明首先获得新金色分枝杆菌中3-甾酮-Δ1-脱氢酶(KSDD)的基因扩增，然后利用pMA5质粒，实现了该基因在模式菌株枯草芽孢杆菌168中的过量表达。本发明构建以4-AD为底物全细胞转化为方法的高产ADD的枯草芽孢杆菌工程菌株，对该菌株的酶活力及发酵性能进行研究发现3-甾酮-Δ1-脱氢酶的活力较出发菌株有了明显提高，以0.1％(w/v)4-AD为底物，全细胞转化10h，底物摩尔转化率达到65.7％，是出发菌株相对转化率的20倍。本发明为微生物一步发酵法生产ADD的工业化提供了有益的指导。