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公开(公告)号:CN105062941A
公开(公告)日:2015-11-18
申请号:CN201510526416.1
申请日:2015-08-25
Applicant: 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所 , 如皋江大食品生物技术研究所有限公司
Abstract: 本发明公开了一种利用重组枯草芽孢杆菌全细胞转化生产L-鸟氨酸的方法,属于生物工程和生物技术领域。本发明将来源于Bacillus cereus的精氨酸酶成功在Bacillus subtilis 168中表达。酶活测定结果表明,重组工程菌的精氨酸酶酶活比原始菌提高了近27倍。以此工程菌作为生物催化剂,以L-精氨酸作为底物,进行转化法生产L-鸟氨酸,采用分批补加底物L-精氨酸的方法在5-L发酵中进行转化法生产L-鸟氨酸。12h后可以得到378.9g/L的L-鸟氨酸,底物L-精氨酸的摩尔转化率达到99.9%。本发明方法生产L-鸟氨酸具有效率高,专一性强,能耗低等优点。
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公开(公告)号:CN105112437A
公开(公告)日:2015-12-02
申请号:CN201510529068.3
申请日:2015-08-25
Applicant: 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所 , 如皋江大食品生物技术研究所有限公司
Abstract: 通过大肠杆菌和钝齿棒杆菌之间的穿梭质粒pXMJ19,将来源于Bacillus cereus的精氨酸酶成功在精氨酸高产菌株C.crenatum SDNN403中表达。酶活测定结果表明,原始菌不具有精氨酸酶的活性,而重组工程菌的精氨酸酶酶活达到24.3U/mg。基于此工程菌株具有高产精氨酸和精氨酸酶的特性,研究了其以葡萄糖为底物,采用一步发酵法生产L-鸟氨酸。采用了发酵过程双阶段pH调控的策略,重组菌在第一阶段的在96h发酵过程中,共积累25.05g/L的L-精氨酸和9.86g/L的L-鸟氨酸。经过第二个阶段的发酵后,最终在108h内,共积累27.91g/L的L-鸟氨酸,而精氨酸的含量仅为0.95g/L。本发明方法生产L-鸟氨酸具有效率高,L-精氨酸和其他杂酸余量低,对于后期产物L-鸟氨酸的分离纯化更加容易。
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公开(公告)号:CN105087628A
公开(公告)日:2015-11-25
申请号:CN201510526225.5
申请日:2015-08-25
Applicant: 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所 , 如皋江大食品生物技术研究所有限公司
Abstract: 通过大肠杆菌和钝齿棒杆菌之间的穿梭质粒pXMJ19,将来源于Bacillus cereus的精氨酸酶成功在C.crenatum SDNN403中表达。酶活测定结果表明,原始菌不具有精氨酸酶的活性,而重组工程菌的精氨酸酶酶活达到24.3U/mg。以此工程菌全细胞菌体作为生物催化剂,以L-精氨酸作为底物,同时基于精氨酸酶酶学性质,确定了最佳的反应温度为40℃和pH为9.0。将200ml LBG培养的重组菌菌体重新悬浮于200ml的底物缓冲液中,在最佳的转化条件下进行转化法生产L-鸟氨酸。8h后可以得到149.2g/L的L-鸟氨酸,底物L-精氨酸的摩尔转化率达到99.5%。本发明方法生产L-鸟氨酸具有效率高,专一性强,能耗低等优点。
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公开(公告)号:CN105950697B
公开(公告)日:2019-10-15
申请号:CN201610574795.6
申请日:2016-07-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种基于微生物发酵法在L‑鸟氨酸的生产中的应用,属于生物技术领域。以重组菌B.subtilis 168/pMA5‑argI作为精氨酸酶来源菌株和L‑精氨酸高产菌株C.crenatum SYPA 5‑5进行双菌混合发酵法以葡萄糖为底物生产L‑鸟氨酸。对B.subtilis 168/pMA5‑argI的转接时间和转接量进行优化,在2.5L C.crenatum SYPA5‑5发酵液中,B.subtilis 168/pMA5‑argI的最佳转接时间为72h,C.crenatum SYPA5‑5和B.subtilis 168/pMA5‑argI的菌种转接比例为1:500~530,在5‑L发酵罐中发酵96h后L‑鸟氨酸的积累量达到32.4g/L。在此过程中,高浓度L‑精氨酸被转化成L‑鸟氨酸,可解除L‑精氨酸合成的反馈抑制作用,从而促进L‑精氨酸合成量的提高。而L‑精氨酸又被转化成L‑鸟氨酸,可进一步提高L‑鸟氨酸的产量。
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公开(公告)号:CN105062941B
公开(公告)日:2019-03-05
申请号:CN201510526416.1
申请日:2015-08-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用重组枯草芽孢杆菌全细胞转化生产L‑鸟氨酸的方法,属于生物工程和生物技术领域。本发明将来源于Bacillus cereus的精氨酸酶成功在Bacillus subtilis 168中表达。酶活测定结果表明,重组工程菌的精氨酸酶酶活比原始菌提高了近27倍。以此工程菌作为生物催化剂,以L‑精氨酸作为底物,进行转化法生产L‑鸟氨酸,采用分批补加底物L‑精氨酸的方法在5‑L发酵中进行转化法生产L‑鸟氨酸。12h后可以得到378.9g/L的L‑鸟氨酸,底物L‑精氨酸的摩尔转化率达到99.9%。本发明方法生产L‑鸟氨酸具有效率高,专一性强,能耗低等优点。
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公开(公告)号:CN105238732A
公开(公告)日:2016-01-13
申请号:CN201510712520.X
申请日:2015-10-28
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12P13/10 , C12N9/78 , C12N15/77 , C12R1/15 , C12Y305/03006
Abstract: 本发明公开了一种利用重组钝齿棒杆菌全细胞转化生产L-瓜氨酸的方法,属于生物工程和生物技术领域。本发明将来源于Lactobacillus brevis的精氨酸脱亚胺酶(ADI)成功在C.crenatum SDNN403中表达,并以此工程菌作为生物催化剂,以L-精氨酸作为底物高效生产L-瓜氨酸。采用分阶段补加底物L-精氨酸的策略,转化48h,L-瓜氨酸的产量达到301.4g/L,精氨酸摩尔转化率达到99.9%。本发明方法生产L-瓜氨酸具有效率高,专一性强,能耗低,底物残留量低等优点。
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公开(公告)号:CN105950697A
公开(公告)日:2016-09-21
申请号:CN201610574795.6
申请日:2016-07-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种基于微生物发酵法在L‑鸟氨酸的生产中的应用,属于生物技术领域。以重组菌B.subtilis 168/pMA5‑argI作为精氨酸酶来源菌株和L‑精氨酸高产菌株C.crenatum SYPA 5‑5进行双菌混合发酵法以葡萄糖为底物生产L‑鸟氨酸。对B.subtilis 168/pMA5‑argI的转接时间和转接量进行优化,在2.5L C.crenatum SYPA5‑5发酵液中,B.subtilis 168/pMA5‑argI的最佳转接时间为72h,C.crenatum SYPA5‑5和B.subtilis 168/pMA5‑argI的菌种转接比例为1:500~530,在5‑L发酵罐中发酵96h后L‑鸟氨酸的积累量达到32.4g/L。在此过程中,高浓度L‑精氨酸被转化成L‑鸟氨酸,可解除L‑精氨酸合成的反馈抑制作用,从而促进L‑精氨酸合成量的提高。而L‑精氨酸又被转化成L‑鸟氨酸,可进一步提高L‑鸟氨酸的产量。
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