公开(公告)号：CN108642100B

公开(公告)日：2020-12-29

申请号：CN201810468484.0

申请日：2018-05-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 徐美娟 ,  饶志明 ,  舒群峰 ,  李静 ,  杨套伟 ,  张显

IPC: C12N1/21 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一种在钝齿棒杆菌中合成L‑鸟氨酸的方法，属于基因工程和代谢工程领域。本发明利用表达质粒pDXW10质粒，将N‑乙酰鸟氨酸脱乙酰酶、N‑乙酰谷氨酸合酶进行表达并且对其RBS进行优化同时对起始密码子进行替代。5‑L发酵罐发酵培养重组钝齿棒杆菌SYPO/pDXW10‑EcargAHY‑SmargEb 72h，L‑鸟氨酸的产量达到46.2g/L，比出发菌株钝齿棒杆菌，L‑鸟氨酸的产量提高了62.2％，生产强度达到0.642g/L/h，并且糖酸转化率为0.414g/g。

公开(公告)号：CN109370975B

公开(公告)日：2020-10-09

申请号：CN201811479829.9

申请日：2018-12-05

Applicant: 江南大学

Inventor： 徐美娟 ,  饶志明 ,  李静 ,  舒群峰 ,  张显 ,  杨套伟

IPC: C12N1/21 ,  C12P13/10 ,  C12N15/77 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一种提高钝齿棒杆菌合成L‑精氨酸产量的方法，属于生物工程技术领域。本发明成功实现了敲除氮转录调控因子AmtR，过量表达铵转运蛋白AmtB的重组钝齿棒杆菌的构建。采用5‑L发酵罐分批发酵策略，优化发酵条件，最终重组钝齿棒杆菌Cc5‑5/pXMJ19‑amtB发酵至96h，重组菌的L‑精氨酸产量达到60.9±1.31g/L，较出发菌株钝齿棒杆菌SYPA5‑5提高了30.56％，生产强度达到0.634g/L·h，并且糖酸转化率为0.36±0.018g/g，实现了L‑精氨酸的高产。同时，该重组钝齿棒杆菌增加了NH4+的利用，说明敲除氮转录调控因子和过量表达铵转运蛋白对L‑精氨酸的产量具有显著效果。

公开(公告)号：CN108893438B

公开(公告)日：2022-09-06

申请号：CN201810661242.3

申请日：2018-06-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  徐美娟 ,  舒群峰 ,  李静 ,  张显 ,  杨套伟

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/77 ,  C12P13/10 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一种提高钝齿棒杆菌合成L‑鸟氨酸产量的方法，属于生物工程技术领域。本发明利用表达质粒pDXW10质粒，将来源于S.marcescens Y213的编码N‑乙酰鸟氨酸脱乙酰酶的基因argE进行克隆表达并测定酶学性质。所得N‑乙酰鸟氨酸脱乙酰酶的比酶活最高为798.89U/mg，最适pH为7.0，pH稳定性为7.0‑9.0，最适温度为37℃，温度稳定性为20‑30℃，添加0.1mM Mn2+，Li+，Mg2+金属离子使比酶活提高50％以上。为国内外首次报道来源于粘质沙雷氏菌的N‑乙酰鸟氨酸脱乙酰酶酶活最高。5‑L发酵罐发酵重组菌株SYPO/pDXW10‑SmargE 96h，L‑鸟氨酸的产量达到38.5g/L，比出发菌株，L‑鸟氨酸的产量提高了33.2％，产率达0.401g/L/h。实现了异源表达N‑乙酰鸟氨酸脱乙酰酶实现L‑鸟氨酸的高效合成。

公开(公告)号：CN109370975A

公开(公告)日：2019-02-22

申请号：CN201811479829.9

申请日：2018-12-05

Applicant: 江南大学

Inventor： 徐美娟 ,  饶志明 ,  李静 ,  舒群峰 ,  张显 ,  杨套伟

IPC: C12N1/21 ,  C12P13/10 ,  C12N15/77 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一种提高钝齿棒杆菌合成L-精氨酸产量的方法，属于生物工程技术领域。本发明成功实现了敲除氮转录调控因子AmtR，过量表达铵转运蛋白AmtB的重组钝齿棒杆菌的构建。采用5-L发酵罐分批发酵策略，优化发酵条件，最终重组钝齿棒杆菌Cc5-5/pXMJ19-amtB发酵至96h，重组菌的L-精氨酸产量达到60.9±1.31g/L，较出发菌株钝齿棒杆菌SYPA5-5提高了30.56％，生产强度达到0.634g/L·h，并且糖酸转化率为0.36±0.018g/g，实现了L-精氨酸的高产。同时，该重组钝齿棒杆菌增加了NH4+的利用，说明敲除氮转录调控因子和过量表达铵转运蛋白对L-精氨酸的产量具有显著效果。

公开(公告)号：CN108893438A

公开(公告)日：2018-11-27

申请号：CN201810661242.3

申请日：2018-06-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  徐美娟 ,  舒群峰 ,  李静 ,  张显 ,  杨套伟

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/77 ,  C12P13/10 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一种提高钝齿棒杆菌合成L-鸟氨酸产量的方法，属于生物工程技术领域。本发明利用表达质粒pDXW10质粒，将来源于S.marcescens Y213的编码N-乙酰鸟氨酸脱乙酰酶的基因argE进行克隆表达并测定酶学性质。所得N-乙酰鸟氨酸脱乙酰酶的比酶活最高为798.89U/mg，最适pH为7.0，pH稳定性为7.0-9.0，最适温度为37℃，温度稳定性为20-30℃，添加0.1mM Mn2+，Li+，Mg2+金属离子使比酶活提高50％以上。为国内外首次报道来源于粘质沙雷氏菌的N-乙酰鸟氨酸脱乙酰酶酶活最高。5-L发酵罐发酵重组菌株SYPO/pDXW10-SmargE 96h，L-鸟氨酸的产量达到38.5g/L，比出发菌株，L-鸟氨酸的产量提高了33.2％，产率达0.401g/L/h。实现了异源表达N-乙酰鸟氨酸脱乙酰酶实现L-鸟氨酸的高效合成。

公开(公告)号：CN109943548A

公开(公告)日：2019-06-28

申请号：CN201910265104.8

申请日：2019-04-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 徐美娟 ,  饶志明 ,  李静 ,  舒群峰 ,  张显 ,  杨套伟

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N1/21 ,  C12P13/10 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一种提高钝齿棒杆菌合成L-精氨酸产量的方法，具体公开了一种通过整合突变改造双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD，修饰pII信号转导蛋白GlnK尿苷酰化，提高L-精氨酸产量的方法，属于生物工程技术领域。本发明成功实现了对双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD的整合突变改造，在此基础上过量表达pII信号转导蛋白GlnK，增强GlnK的尿苷酰化。采用5-L发酵罐分批发酵策略，优化发酵条件，最终重组钝齿棒杆菌Cc-HDAA/pXMJ19-glnK发酵至96h，重组菌的L-精氨酸产量达到52.2g/L，生产强度达到0.544g/L·h，实现了L-精氨酸的高产。

公开(公告)号：CN108642100A

公开(公告)日：2018-10-12

申请号：CN201810468484.0

申请日：2018-05-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 徐美娟 ,  饶志明 ,  舒群峰 ,  李静 ,  杨套伟 ,  张显

IPC: C12P13/10 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一种在钝齿棒杆菌中合成L-鸟氨酸的方法，属于基因工程和代谢工程领域。本发明利用表达质粒pDXW10质粒，将N-乙酰鸟氨酸脱乙酰酶、N-乙酰谷氨酸合酶进行表达并且对其RBS进行优化同时对起始密码子进行替代。5-L发酵罐发酵培养重组钝齿棒杆菌SYPO/pDXW10-EcargAHY-SmargE b72h，L-鸟氨酸的产量达到46.2g/L，比出发菌株钝齿棒杆菌，L-鸟氨酸的产量提高了62.2％，生产强度达到0.642g/L/h，并且糖酸转化率为0.414g/g。