公开(公告)号：CN117535334A

公开(公告)日：2024-02-09

申请号：CN202311250176.8

申请日：2023-09-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘秀霞 ,  黄丹妮 ,  邹宇 ,  杨艳坤 ,  刘春立 ,  白仲虎

IPC: C12N15/77 ,  C12N15/31 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一种基于EsaR/I群体感应的双功能动态调控系统及其优化方法，该系统能够在C.glutamicum成功表达并实现代谢调控，不需要额外添加诱导剂，通过胞内表达生产信号分子的酶实现，是革兰氏阴性QS系统第一次在C.glutamicum中的应用，为C.glutamicum作为合成生物学底盘生物提供了途径非依赖型调控路线，丰富了C.glutamicum基因操作的工具箱，加速了C.glutamicum微生物细胞工厂的创制。

公开(公告)号：CN113652442A

公开(公告)日：2021-11-16

申请号：CN202110998111.6

申请日：2021-08-27

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘秀霞 ,  黄丹妮 ,  余心宇 ,  杨艳坤 ,  白仲虎

IPC: C12N15/77

Abstract: 本发明基于pEC‑XK99E中的pGA1棒杆菌复制子这一在谷氨酸棒杆菌中拷贝数约为30的低拷贝质粒复制子，将复制蛋白Rep的325位异亮氨酸突变为苏氨酸、398位编码丝氨酸的氨基酸变为同义密码子，成功获得了一种可以提高棒杆菌质粒拷贝数的复制子pGA1‑Rep‑I325T/S398。将该复制子用于高拷贝质粒的构建，携带有pGA1‑Rep‑I325T/S398复制子的质粒pEC‑XK99E‑Rep‑T/S在谷氨酸棒杆菌中复制后，通过质粒体外抽提证实增加了菌体中质粒的数量。构建pEC‑XK99E‑EGFP‑Rep‑T/S质粒，通过测定不同菌体量下的荧光值，与为突变质粒相比荧光量增加三倍即改造后的质粒提高了蛋白的表达量。同时通过荧光定量PCR手段，测定突变后拷贝数为野生型复制子的质粒的8倍约为245。

公开(公告)号：CN113652442B

公开(公告)日：2023-04-07

申请号：CN202110998111.6

申请日：2021-08-27

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘秀霞 ,  黄丹妮 ,  余心宇 ,  杨艳坤 ,  白仲虎

IPC: C12N15/77

Abstract: 本发明基于pEC‑XK99E中的pGA1棒杆菌复制子这一在谷氨酸棒杆菌中拷贝数约为30的低拷贝质粒复制子，将复制蛋白Rep的325位异亮氨酸突变为苏氨酸、398位编码丝氨酸的氨基酸变为同义密码子，成功获得了一种可以提高棒杆菌质粒拷贝数的复制子pGA1‑Rep‑I325T/S398。将该复制子用于高拷贝质粒的构建，携带有pGA1‑Rep‑I325T/S398复制子的质粒pEC‑XK99E‑Rep‑T/S在谷氨酸棒杆菌中复制后，通过质粒体外抽提证实增加了菌体中质粒的数量。构建pEC‑XK99E‑EGFP‑Rep‑T/S质粒，通过测定不同菌体量下的荧光值，与为突变质粒相比荧光量增加三倍即改造后的质粒提高了蛋白的表达量。同时通过荧光定量PCR手段，测定突变后拷贝数为野生型复制子的质粒的8倍约为245。