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公开(公告)号：CN109097362B
公开(公告)日：2022-05-20
申请号：CN201810990251.7
申请日：2018-08-28
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/77
Abstract: 本发明公开了操纵子、其载体及其应用，其中，所述操纵子序列至少包括，3’端位于谷氨酸棒杆菌SEQ ID NO：6基因编码序列ATG上游201～257bp中任一碱基、5’端位于谷氨酸棒杆菌SEQ ID NO：6基因编码序列ATG上游308bp～345bp中任一碱基。本发明操纵子被诱导剂诱导后，蛋白表达活性显著高于传统Ptac的诱导表达活性，是一种超高效操纵子。本发明操纵子能够用于原核生物内源或外源蛋白的高效表达。
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公开(公告)号：CN113549619B
公开(公告)日：2022-04-22
申请号：CN202110785194.0
申请日：2021-07-12
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/77 , C12N1/21 , C07K14/435 , C12R1/15
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌高强度乙醇诱导启动子、其质粒载体及其应用，谷氨酸棒杆菌高强度乙醇诱导启动子，其基因序列如SEQ ID NO.5所示。本发明使用启动子PA368构建蛋白表达载体，并通过在培养基中添加乙醇，实现重组蛋白在谷氨酸棒杆菌二次生长阶段的高水平表达，克服了现有启动子强度低、诱导物渗透性且昂贵等不足，相比于现有的谷氨酸棒杆菌强启动子PH36，本发明启动子PA368调控下的绿色荧光蛋白表达水平提高了2.43倍，同时在分泌重组蛋白VHH及XynA时可以实现更高的表达水平。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113652442A
公开(公告)日：2021-11-16
申请号：CN202110998111.6
申请日：2021-08-27
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/77
Abstract: 本发明基于pEC‑XK99E中的pGA1棒杆菌复制子这一在谷氨酸棒杆菌中拷贝数约为30的低拷贝质粒复制子，将复制蛋白Rep的325位异亮氨酸突变为苏氨酸、398位编码丝氨酸的氨基酸变为同义密码子，成功获得了一种可以提高棒杆菌质粒拷贝数的复制子pGA1‑Rep‑I325T/S398。将该复制子用于高拷贝质粒的构建，携带有pGA1‑Rep‑I325T/S398复制子的质粒pEC‑XK99E‑Rep‑T/S在谷氨酸棒杆菌中复制后，通过质粒体外抽提证实增加了菌体中质粒的数量。构建pEC‑XK99E‑EGFP‑Rep‑T/S质粒，通过测定不同菌体量下的荧光值，与为突变质粒相比荧光量增加三倍即改造后的质粒提高了蛋白的表达量。同时通过荧光定量PCR手段，测定突变后拷贝数为野生型复制子的质粒的8倍约为245。
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公开(公告)号：CN119709741A
公开(公告)日：2025-03-28
申请号：CN202411752458.2
申请日：2024-12-02
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/77 , C12N15/31 , C12N15/65 , C12Q1/6897 , G01N21/64 , C12R1/15
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌中的BDPs活性表征温敏型逆变器及其制备方法，本发明的温敏型逆变器开关可以根据温度的变化进行基因的精确控制，在合适的时间段开启或关闭特定基因的表达，这种调控方式简化了在不同阶段对不同基因的调控流程，从而在代谢工程中实现更精确和灵活的控制；通过温度调节，可以有效提高代谢途径中关键酶的活性，最大化目标产物的合成量。
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公开(公告)号：CN113652442B
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202110998111.6
申请日：2021-08-27
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/77
Abstract: 本发明基于pEC‑XK99E中的pGA1棒杆菌复制子这一在谷氨酸棒杆菌中拷贝数约为30的低拷贝质粒复制子，将复制蛋白Rep的325位异亮氨酸突变为苏氨酸、398位编码丝氨酸的氨基酸变为同义密码子，成功获得了一种可以提高棒杆菌质粒拷贝数的复制子pGA1‑Rep‑I325T/S398。将该复制子用于高拷贝质粒的构建，携带有pGA1‑Rep‑I325T/S398复制子的质粒pEC‑XK99E‑Rep‑T/S在谷氨酸棒杆菌中复制后，通过质粒体外抽提证实增加了菌体中质粒的数量。构建pEC‑XK99E‑EGFP‑Rep‑T/S质粒，通过测定不同菌体量下的荧光值，与为突变质粒相比荧光量增加三倍即改造后的质粒提高了蛋白的表达量。同时通过荧光定量PCR手段，测定突变后拷贝数为野生型复制子的质粒的8倍约为245。
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公开(公告)号：CN109097362A
公开(公告)日：2018-12-28
申请号：CN201810990251.7
申请日：2018-08-28
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/77
Abstract: 本发明公开了操纵子、其载体及其应用，其中，所述操纵子序列至少包括，3’端位于谷氨酸棒杆菌SEQ ID NO：6基因编码序列ATG上游201～257bp中任一碱基、5’端位于谷氨酸棒杆菌SEQ ID NO：6基因编码序列ATG上游308bp～345bp中任一碱基。本发明操纵子被诱导剂诱导后，蛋白表达活性显著高于传统Ptac的诱导表达活性，是一种超高效操纵子。本发明操纵子能够用于原核生物内源或外源蛋白的高效表达。
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公开(公告)号：CN113549619A
公开(公告)日：2021-10-26
申请号：CN202110785194.0
申请日：2021-07-12
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/77 , C12N1/21 , C07K14/435 , C12R1/15
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌高强度乙醇诱导启动子、其质粒载体及其应用，谷氨酸棒杆菌高强度乙醇诱导启动子，其基因序列如SEQ ID NO.5所示。本发明使用启动子PA368构建蛋白表达载体，并通过在培养基中添加乙醇，实现重组蛋白在谷氨酸棒杆菌二次生长阶段的高水平表达，克服了现有启动子强度低、诱导物渗透性且昂贵等不足，相比于现有的谷氨酸棒杆菌强启动子PH36，本发明启动子PA368调控下的绿色荧光蛋白表达水平提高了2.43倍，同时在分泌重组蛋白VHH及XynA时可以实现更高的表达水平。
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