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公开(公告)号：CN118562778A
公开(公告)日：2024-08-30
申请号：CN202410739865.3
申请日：2024-06-07
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种番茄红素环化酶突变体及其在构建视黄醛高产菌中的应用，构建得到了一种泛菌属(Pantoea)来源的番茄红素环化酶突变体(Phe49Tyr，Thr271Ile)，将其用于构建视黄醛生产菌株中，将搭载甲羟戊酸途径的质粒pACYC‑ESMPD‑idi(包含甲羟戊酸代谢途径的基因：粪肠球菌E.faecalis来源的基因mvaE，mvaS，甲烷八叠球菌属M.mazei衍生的基因mvK，肺炎链球菌S.pneumoniae来源的基因mvaD，pmK，idi)、携带葡萄糖激酶(glK)和半乳糖渗透酶(galP)和丙酮酸氧化酶(pforA)的质粒pET‑AGG、携带番茄红素环化酶突变体基因的质粒pRSF‑crtEBYIIIBRBS转入大肠杆菌缺陷菌ΔpoxBΔppsAΔptsGΔcrrΔadhEΔldhAΔzwfΔybbOΔgdhA中表达得到重组菌，提高了视黄醛的产量和生产效率，为大肠杆菌生产视黄醛提供了有利指导方向。
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公开(公告)号：CN116732108A
公开(公告)日：2023-09-12
申请号：CN202310197297.4
申请日：2023-03-03
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/90 , C12N9/22 , C12N15/113 , C12N15/81
Abstract: 本发明公开了一种提高基因敲除效率的方法及其应用。本发明提供的敲除技术是基于CRISPR‑Cas9质粒，进一步采用“回补策略”来进行目标基因的敲除。本发明所述的“回补策略”即是将目标敲除基因突变后表达于外源质粒，将基因组上的目标基因敲除后再将回补质粒消除，从而达到目标基因的缺失。“回补策略”的使用使得目标基因的敲除效率从0提高到了8％。
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公开(公告)号：CN116606752A
公开(公告)日：2023-08-18
申请号：CN202310570768.1
申请日：2023-05-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种毕赤酵母甲酸盐营养缺陷型菌株及其制备方法和应用，其包括：毕赤酵母中包含一个缺失fh和/或gd的质粒。本发明提供的菌株能够在甲酸代谢中，基于K.phaffii.GS115内源甲酸同化途径的关键蛋白进行改进，针对K.phaffii.GS115菌株的甲酸代谢进行了改进。本发明提供的菌株能够实现甲酸盐营养缺陷型菌株的制备，表明了相应极影在甲酸同化途径中的重要作用。
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公开(公告)号：CN116559307A
公开(公告)日：2023-08-08
申请号：CN202310030885.9
申请日：2023-01-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种菌株发酵液中紫苏醇的高效液相色谱检测方法，本发明方法能够直接对菌株发酵液中紫苏醇进行高效液相色谱检测，相比于气相色谱的检测方法,更为直接,直接对培养基进行检测,省去了气相色谱对培养基的后处理步骤,步骤相对于气相色谱来说较为简单,并且检测灵敏度与气象色谱检测相当，同时还能够减少样品的损失率。
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公开(公告)号：CN116515877A
公开(公告)日：2023-08-01
申请号：CN202211347950.2
申请日：2022-10-31
Applicant: 江南大学 , 深圳市小分子新药创新中心有限公司
Abstract: 本发明公开了一种高产外膜囊泡介导番茄红素分泌和高产的方法，包括，通过大肠杆菌缺陷菌Δlpp‑ΔnlpI‑ΔmlaE‑ΔtolA提高外膜囊泡产生，介导番茄红素的分泌运出，实现高产番茄红素；所述大肠杆菌缺陷菌Δlpp‑ΔnlpI‑ΔmlaE‑ΔtolA，基于野生菌BL21(DE3)基因依次敲除基因lpp、nlpI、mlaE、tolA，得到缺陷菌Δlpp‑ΔnlpI‑ΔmlaE‑ΔtolA。本发明提供的大肠杆菌缺陷菌Δlpp‑ΔnlpI‑ΔmlaE‑ΔtolA，和野生菌比，该缺陷菌生产的OMVs提高了6.1倍。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113549619A
公开(公告)日：2021-10-26
申请号：CN202110785194.0
申请日：2021-07-12
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/77 , C12N1/21 , C07K14/435 , C12R1/15
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌高强度乙醇诱导启动子、其质粒载体及其应用，谷氨酸棒杆菌高强度乙醇诱导启动子，其基因序列如SEQ ID NO.5所示。本发明使用启动子PA368构建蛋白表达载体，并通过在培养基中添加乙醇，实现重组蛋白在谷氨酸棒杆菌二次生长阶段的高水平表达，克服了现有启动子强度低、诱导物渗透性且昂贵等不足，相比于现有的谷氨酸棒杆菌强启动子PH36，本发明启动子PA368调控下的绿色荧光蛋白表达水平提高了2.43倍，同时在分泌重组蛋白VHH及XynA时可以实现更高的表达水平。
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公开(公告)号：CN106701810B
公开(公告)日：2020-04-21
申请号：CN201611141549.8
申请日：2016-12-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种谷氨酸棒状杆菌的基因编辑系统，其具有较高的基因编辑效率。谷氨酸棒状杆菌中待编辑的目的基因具有5′‑（N20）‑NGG‑3′结构，N为A、T、C或G，该基因编辑系统包括cas9表达载体和sgRNA表达载体；cas9表达载体包括cas9序列和SD序列，cas9序列如SEQ ID No.1所示，SD序列如SEQ ID No.2所示、并连接在cas9序列的始密码子ATG前；sgRNA表达载体的包含sgRNA序列和同源修复序列，sgRNA序列为crRNA与trancrRNA 连接形成的复合体序列，trancrRNA序列如SEQ ID No.3所示，crRNA序列为20bp的引导序列、与目的基因的N20序列相同。
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公开(公告)号：CN110511953A
公开(公告)日：2019-11-29
申请号：CN201811015441.3
申请日：2018-08-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种适用于谷氨酸棒杆菌的重组表达载体，该表达载体适用于在谷氨酸棒杆菌中表达外源蛋白并具有较高的表达水平。一种适用于谷氨酸棒杆菌的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体中外源蛋白基因的启动子为∆cspB启动子、信号肽为∆cspB信号肽，所述∆cspB启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，∆cspB信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。本发明中的外源蛋白在表达过程中，在信号肽的引导下，表达的外源蛋白能分泌到胞外，不需要经过菌体破碎，分泌出的外源蛋白相对于胞内表达易于纯化；且无胞外蛋白酶，分泌出的外源蛋白在培养基中较为稳定。此外，本发明还提供了外源蛋白的外源蛋白表达系统、应用和外源蛋白的制备方法。
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公开(公告)号：CN106636174B
公开(公告)日：2019-11-22
申请号：CN201610623309.5
申请日：2016-07-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了表达外源蛋白的毕赤酵母菌株及表达系统，该毕赤酵母菌株的GTPI基因发生突变，突变后的毕赤酵母基因不能编码甘油转运蛋白或编码的甘油转运蛋白没有活性，能够在甘油诱导条件下启动PAOX1的转录，从而提高毕赤酵母在甘油诱导条件下AOX1的表达量，从而提高外源蛋白的表达量。同时，本发明还提供了所述表达外源蛋白的毕赤酵母的构建方法，所述表达外源蛋白的毕赤酵母的诱导表达方法，该诱导表达方法能够有效提高外源蛋白表达量及最终细胞浓度。
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公开(公告)号：CN106566820B
公开(公告)日：2019-07-16
申请号：CN201610836135.0
申请日：2016-09-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了α‑淀粉酶的制备方法，其能解决现有技术中通过枯草芽孢杆菌制备α‑淀粉酶后期纯化步骤繁琐、得到纯品不易的技术问题。其包括以下步骤：（2）在α‑淀粉酶基因上游添加e3 SD序列、下游添加组氨酸标签，获得改造后的α‑淀粉酶基因；（3）将改造后的α‑淀粉酶基因连接到载体pxmj19‑aph213上，获得重组表达载体pxmj19‑aph213‑amy；（4）将重组表达载体pxmj19‑aph213‑amy转入谷氨酸棒杆菌，获得重组菌；（5）培养重组菌，分泌表达α‑淀粉酶；（6）α‑淀粉酶的纯化，包括：将含有α‑淀粉酶的上清进行亲和层析，介质为镍柱。
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