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公开(公告)号：CN116918801A
公开(公告)日：2023-10-24
申请号：CN202310884940.0
申请日：2023-07-19
申请人： 江苏拓弘康恒医药有限公司
IPC分类号： A01N1/02
摘要： 本发明提供一种可供冻存的细胞保存制剂，包括5.0％～10.0％(v/v)的丙三醇、0.1％‑3.4％的琥珀酰明胶(m/v)、不高于1％(m/v)的泊洛沙姆188、1.0％‑10.0％(m/v)的羟乙基淀粉、1.0％～10.0％(m/v)的人血白蛋白，采用复方电解质注射液加至处方量。可供冻存的细胞保存制剂能够使得细胞制剂在回输前的较长时间内保持高活率，保证细胞制剂治疗效果的同时，对人体无毒副作用。此种细胞制剂处方安全性高、稳定性强，适于推广应用。
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公开(公告)号：CN115386599B
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202210838884.2
申请日：2022-07-18
申请人： 江苏拓弘康恒医药有限公司
摘要： 本发明涉及医药生物技术领域，尤其涉及一种mRNA‑LNP递送系统、递送工艺及其在人源间充质干细胞应用，包括负载一种或多种mRNA的LNP非病毒载体，所述LNP非病毒载体包括可电离阳离子脂质、胆固醇、中性辅助磷脂或/且PEG脂质，所述可电离阳离子脂质为Dlin‑MC3‑DMA或DOTAP；所述中性辅助磷脂为DSPC或DOPE；所述PEG脂质为DSPE‑PEG2000。本发明创新点在于一方面自设计脂质组分比例形成mRNA‑LNP，另一方面这些复合表征的mRNA‑LNP能够实现难转染细胞MSC的有效转染，mRNA‑LNP对MSC安全性良好，孵育24h无明显细胞毒、转染过程操作简便，本发明为MSC转染提供了新的简便思路，对增强基因修饰型干细胞的胞内蛋白表达提供了更佳的选择。
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公开(公告)号：CN110393824A
公开(公告)日：2019-11-01
申请号：CN201910532484.7
申请日：2019-06-19
申请人： 江苏拓弘康恒医药有限公司
摘要： 本发明涉及一种用于骨损伤修复的酯化琼脂糖-细胞复合纤维支架，其特征在于：包括酯化琼脂糖生物支架以及分布于所述酯化琼脂糖生物支架中的种子细胞，所述酯化琼脂糖生物支架为酯化琼脂糖、I型胶原和锰磷酸三钙的三元复合纳米纤维支架，复合纳米纤维的直径为500-600nm，所述锰磷酸三钙中锰元素的浓度为2.5-10mol％。该复合纤维支架具有生物安全性高、良好的生物相容性、取向性及多孔物理结构，加入生物活性的无机非金属，既优化了力学性能，又具有骨诱导活性，能够促进软骨细胞或骨髓间充质干细胞的粘附、增值、成软骨分化基因表达及骨细胞外基质的生成，加快骨愈合。
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公开(公告)号：CN112514888A
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011399412.9
申请日：2020-12-02
申请人： 江苏拓弘康恒医药有限公司
IPC分类号： A01N1/02 , C12N5/0775
摘要： 本发明涉及生物细胞技术领域，尤其为一种用于脐带间充质干细胞的冻存保护液制备工艺，包括以下步骤：首先将脐带组织进行剪开和铺开，然后使用消毒液对脐带组织的表面进行清理；对脐带组织进行剪碎处理，然后对剪碎之后的脐带组织内加入胰酶和EDTA进行消化处理；对酶解消化后的细胞进行离心处理然后在完全培养基重选后，进行密度传代；对液体进行离心处理；对离心得到的上清中进行加入二甲基亚砜，然后进行混合处理，再转入液氮中进行长期的保存处理，本发明中，通过上述技术工艺，不仅可以有效的避免牛血清的使用，从而尽可能少引入异源的病毒和致敏源，而且可以有效的提高脐带间充质干细胞的冻存保护液的质量。
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公开(公告)号：CN116948957A
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202310884942.X
申请日：2023-07-19
申请人： 江苏拓弘康恒医药有限公司
IPC分类号： C12N5/0775 , C12P21/02 , C07K14/475
摘要： 本发明提供一种诱导脐带间充质干细胞分泌脑源性神经营养因子的方法，(1)第一诱导阶段：将贴壁脐带间充质干细胞采用诱导培养基1培养至细胞成星型聚集生长；诱导培养基1配方为：人血小板裂解物(HPL)3％、N2添加物1‑3％、外用人表皮生长因子(EGF)10‑100ng/ml、外用重组人碱性成纤维生长因子(bFGF)10‑100ng/ml、DMEM/F‑12培养基至使用量；(2)第二诱导阶段：弃去诱导培养基1，将步骤(1)获得的细胞采用诱导培养基2进行培养，获得脑源性神经营养因子；诱导培养基2配方为：外用重组人碱性成纤维生长因子(bFGF)20ng/ml、人血小板裂解物(HPL)0.1％、1‑甲基‑3‑异丁基黄嘌呤(IBMX)0.1‑2mM、无水醋酸钠5‑20mM、DMEM/F‑12培养基至使用量。本发明方法操作简单、成本低，安全性高、效率高。
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公开(公告)号：CN115404238A
公开(公告)日：2022-11-29
申请号：CN202111580132.2
申请日：2021-12-22
申请人： 江苏拓弘康恒医药有限公司
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12N15/10 , C12R1/19
摘要： 一种高翻译稳定性BDNF mRNA的设计和制备方法，包括：在野生型人BDNF基因序列的基础上，通过哺乳动物细胞密码子偏好设计优化基因序列来作为稳定型BDNF序列；同时，舍弃了野生型人BDNF基因中原有的5’‑/3’‑非翻译区(UTR)，转而采用长度短于100nt的5’‑UTR和珠蛋白的3’‑UTR来修饰BDNF mRNA。此设计下的BDNF mRNA在经过体外转录合成、加帽/加尾反应后可被用于包括转染间充质干细胞在内的下游应用。结合其方法有效避免了现有技术中体外转录操作存在花费高以及耗时长等问题、制约了相关细胞药物研发的进度的缺陷。
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公开(公告)号：CN114540287A
公开(公告)日：2022-05-27
申请号：CN202111599514.X
申请日：2021-12-24
申请人： 江苏拓弘康恒医药有限公司
IPC分类号： C12N5/0775
摘要： 本申请公开一种节约脐带间充质干细胞培养工序的培养方法，属于生物医药领域，包括：脐带获取；华通氏胶获取；剪碎；铺瓶：用去前段的移液枪枪头将组织块转入到T175细胞培养瓶中，每个培养瓶加入20ml原代培养液，置于培养箱中静置培养；传代或冻存：显微镜下观察每个培养瓶10个组织块爬出细胞，每个集落融合度80％‑90％时进行消化传代或冻存，消化下来的细胞进行计数后，结果未到达冻存要求，按照不少于4000个/cm2密度接种至新的培养瓶中，置于培养箱中静置培养，若计数结果达到冻存要求则按5×106个/ml进行冻存。本发明极大简化了脐带间充质干细胞培养工序，降低了生产成本的同时也保证了细胞质量，另外简单的操作工序也大大降低了因操作导致的污染风险。
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公开(公告)号：CN110755365B
公开(公告)日：2020-12-08
申请号：CN201910532483.2
申请日：2019-06-19
申请人： 江苏拓弘康恒医药有限公司
摘要： 本发明涉及一种基于间充质干细胞外泌体的快速凝胶化水凝胶的制备方法，其特征在于，水凝胶由凝胶原液和快速凝胶化反应溶液发生交联反应后得到；其中，以重量为基准，所述凝胶原液包括以下比例的各组分：间充质干细胞外泌体提取液20‑30份、泊洛沙姆407 10‑15份、泊洛沙姆188 5‑10份、高分子调节剂0.3‑1份、天然高分子巯基化衍生物0.4‑1份、保湿剂0.4‑0.8份和水44‑63份；所述凝胶原液的pH为5‑6；所述快速凝胶化反应溶液为二硫代联吡啶类巯基反应活性交联剂的水溶液。
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公开(公告)号：CN110755365A
公开(公告)日：2020-02-07
申请号：CN201910532483.2
申请日：2019-06-19
申请人： 江苏拓弘康恒医药有限公司
摘要： 本发明涉及一种基于间充质干细胞外泌体的快速凝胶化水凝胶的制备方法，其特征在于，水凝胶由凝胶原液和快速凝胶化反应溶液发生交联反应后得到；其中，以重量为基准，所述凝胶原液包括以下比例的各组分：间充质干细胞外泌体提取液20-30份、泊洛沙姆407 10-15份、泊洛沙姆188 5-10份、高分子调节剂0.3-1份、天然高分子巯基化衍生物0.4-1份、保湿剂0.4-0.8份和水44-63份；所述凝胶原液的pH为5-6；所述快速凝胶化反应溶液为二硫代联吡啶类巯基反应活性交联剂的水溶液。
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公开(公告)号：CN117929073A
公开(公告)日：2024-04-26
申请号：CN202311849456.0
申请日：2023-12-29
申请人： 江苏拓弘康恒医药有限公司
摘要： 本发明提供一种间充质干细胞成软骨分化定量检测方法，其中番红O染料脱色液(即CPC脱色液)是由磷酸钠、柠檬酸、CPC和纯水组成，配制过程简单；该方法可高效快速地洗脱细胞内番红O染液，通过检测脱色液OD值，可准确定量与细胞结合的番红O染料。CPC脱色液状态稳定，从根本上解决了异丙醇脱色效果不佳和易挥发的缺点。又因CPC脱色液较强的脱色能力和溶液稳定性，实验人员可根据实际情况适当缩短或延长脱色时间，进而提高工作效率。
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