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公开(公告)号：CN113736799B
公开(公告)日：2024-02-06
申请号：CN202111092942.3
申请日：2021-09-17
摘要： 本发明提供山羊副流感病毒3型感染性cDNA克隆构建方法及其应用，属于生物技术领域。该构建方法包括：以山羊副流感病毒3型的总RNA反转录产物为模板，扩增A、B、C和D片段；将片段A和B、片段C和D分别插入pCI‑neo‑1载体中，得到重组载体pCI‑A‑B、pCI‑C‑D；以pCI‑A‑B为模板，扩增片段A‑B；以pCI‑C‑D为模板，扩增C‑D片段；将线性化pYES1L载体、A‑B和C‑D片段混和，导入酵母内进行同源重组，得到山羊副流感病毒3型感染性cDNA克隆质粒。本发明构建方法效率高，得到的感染性cDNA克隆拯救的病毒感染细胞后能够快速产生细胞病变，病毒滴度高，且保持稳定。
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公开(公告)号：CN113736799A
公开(公告)日：2021-12-03
申请号：CN202111092942.3
申请日：2021-09-17
摘要： 本发明提供山羊副流感病毒3型感染性cDNA克隆构建方法及其应用，属于生物技术领域。该构建方法包括：以山羊副流感病毒3型的总RNA反转录产物为模板，扩增A、B、C和D片段；将片段A和B、片段C和D分别插入pCI‑neo‑1载体中，得到重组载体pCI‑A‑B、pCI‑C‑D；以pCI‑A‑B为模板，扩增片段A‑B；以pCI‑C‑D为模板，扩增C‑D片段；将线性化pYES1L载体、A‑B和C‑D片段混和，导入酵母内进行同源重组，得到山羊副流感病毒3型感染性cDNA克隆质粒。本发明构建方法效率高，得到的感染性cDNA克隆拯救的病毒感染细胞后能够快速产生细胞病变，病毒滴度高，且保持稳定。
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公开(公告)号：CN118064377A
公开(公告)日：2024-05-24
申请号：CN202410187842.6
申请日：2024-02-20
申请人： 江苏省农业科学院
IPC分类号： C12N5/20 , C07K16/12 , G01N33/577 , G01N33/569
摘要： 本发明公开了一种分泌抗绵羊肺炎支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗与应用，所述的杂交瘤细胞株为杂交瘤细胞株1A11，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C202408。所述的杂交瘤细胞株1A11分泌的单克隆抗体为单克隆抗体1A11，本发明所提供的单克隆抗体1A11可用于检测绵羊肺炎支原体，特异性强，不与猪鼻支原体、猪肺炎支原体、鸡毒支原体和牛支原体等常见动物支原体发生反应。本发明基于单克隆抗体1A11建立的双抗夹心ELISA方法的批间和批内变异系数均低于10％，特异性、重复性、敏感性良好，与CCU含量呈正相关，是一种快速、简易、准确的病原检测方法，对绵羊肺炎支原体的快速定量和疫苗研究具有重要意义。
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公开(公告)号：CN109825648B
公开(公告)日：2023-02-28
申请号：CN201910260318.6
申请日：2019-04-02
申请人： 江苏省农业科学院
摘要： 本发明提供检测绵羊肺炎支原体和小反刍兽疫病毒的引物组合物、试剂盒及应用，属于生物技术和分子生物学领域。检测绵羊肺炎支原体和小反刍兽疫病毒的引物组合物，包括引物对A和引物对B，所述引物对A包括引物1和引物2，所述引物对B包括引物3和引物4，所述引物1‑4的核苷酸序列如SEQ ID NO:1‑4所示。本发明引物组合物可以用于同时或单独检测绵羊肺炎支原体和小反刍兽疫病毒，操作简单、特异性强、敏感性高，显著提高了检测效率，避免了一次只能检测一种病原，节省时间、避免污染、方便临床呼吸道疾病样品的快速检测，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN113025531B
公开(公告)日：2023-01-24
申请号：CN202110341915.9
申请日：2021-03-30
申请人： 江苏省农业科学院
摘要： 本发明公开了一株绵羊肺炎支原体及其在抗绵羊肺炎支原体制剂筛选中的应用，所述绵羊肺炎支原体的分类命名为绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)NJ01株，已保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2020907，保藏日期为2020年12月14日。本发明所提供的菌株NJ01培养生长速度快、滴度高，可达1010CCU/mL，在特定培养基中经复苏传代培养后，只需要10‑72h即可变色，这为抗绵羊肺炎支原体制剂的测定节约了时间，提高了效率，可用于抗支原体制剂的快速筛选等。
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公开(公告)号：CN112920976B
公开(公告)日：2023-01-24
申请号：CN202110341911.0
申请日：2021-03-30
申请人： 江苏省农业科学院
摘要： 本发明公开了一株绵羊肺炎支原体强毒株及其应用，所述绵羊肺炎支原体的分类命名为绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)NJ01株，已保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M 2020907，保藏日期为2020年12月14日。所述的应用为上述绵羊肺炎支原体在感染发病和制备治疗羊支原体肺炎药物中的应用。本发明的绵羊肺炎支原体强毒株培育采用的支原体培养基，其制备简便、成本低、培养支原体变色快且滴度高。
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公开(公告)号：CN111041000A
公开(公告)日：2020-04-21
申请号：CN201911407906.4
申请日：2019-12-31
申请人： 江苏省农业科学院
IPC分类号： C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/68 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/535 , C12R1/91
摘要： 本发明提供一株分泌抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于生物技术领域。分泌抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D6D10，其保藏编号为CCTCC NO：C2019269。本发明还提供所述杂交瘤细胞株分泌的抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体及其在制备裂谷热病毒NSs蛋白抗体检测试剂盒方面的应用。本发明杂交瘤细胞2D6D10能够产生针对RVFV非结构蛋白NSs蛋白的单克隆抗体，该单克隆抗体具有阻断作用，因此本发明的阻断ELISA试剂盒可用于病毒感染与灭活疫苗或缺失疫苗免疫抗体的鉴别诊断。
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公开(公告)号：CN110295254A
公开(公告)日：2019-10-01
申请号：CN201910654233.6
申请日：2019-07-19
申请人： 江苏省农业科学院
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11
摘要： 本发明提供一种鉴别检测裂谷热病毒的双重荧光定量RT-PCR引物及探针，属于生物技术领域。本发明设计了一对针对裂谷热病毒L基因的特异性检测引物L-F、L-R及一条荧光探针L-P，一对针对裂谷热病毒S片段的特异性检测引物S-F、S-R及一条荧光探针S-P，并优化了该方法的特异性引物及荧光探针的浓度和反应条件。本发明提供的双重荧光定量RT-PCR方法可以检测裂谷热病毒的感染，同时可以鉴别裂谷热病毒野生株和NSs缺失株(包括Clone 13及其他缺失株)，从而将感染动物同被免疫过的动物区分开来。具有操作简单、灵敏度高、特异性强、重复性好等优点，不仅可以节约成本，还可以为疫情检测和控制争取到宝贵的时间。
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公开(公告)号：CN109825648A
公开(公告)日：2019-05-31
申请号：CN201910260318.6
申请日：2019-04-02
申请人： 江苏省农业科学院
摘要： 本发明提供检测绵羊肺炎支原体和小反刍兽疫病毒的引物组合物、试剂盒及应用，属于生物技术和分子生物学领域。检测绵羊肺炎支原体和小反刍兽疫病毒的引物组合物，包括引物对A和引物对B，所述引物对A包括引物1和引物2，所述引物对B包括引物3和引物4，所述引物1-4的核苷酸序列如SEQ ID NO:1-4所示。本发明引物组合物可以用于同时或单独检测绵羊肺炎支原体和小反刍兽疫病毒，操作简单、特异性强、敏感性高，显著提高了检测效率，避免了一次只能检测一种病原，节省时间、避免污染、方便临床呼吸道疾病样品的快速检测，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN109321532A
公开(公告)日：2019-02-12
申请号：CN201811167484.3
申请日：2018-10-08
申请人： 江苏省农业科学院
IPC分类号： C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/535 , G01N33/569
摘要： 本发明公开了一种用于检测山羊副流感病毒3型（CPIV3）的双抗体夹心ELISA检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有由保藏编号为CCTCC NO.C201627和CCTCC NO.C2018151的杂交瘤细胞株分泌产生的抗CPIV3单克隆抗体2E6和1F8。本发明以纯化的1F8单抗为捕获抗体，以辣根过氧化物酶标记的2E6单抗为检测抗体，建立了检测CPIV3的双抗体夹心ELISA方法。本发明构建的试剂盒检测CPIV3病原快速、稳定、特异性好、灵敏度高，可快速检测样品中是否含有CPIV3病毒粒子；本发明适用于养殖场感染CPIV3的高通量检测。
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