公开(公告)号：CN116004593B

公开(公告)日：2024-04-12

申请号：CN202211559294.2

申请日：2022-12-06

申请人： 江苏集萃未来食品技术研究所有限公司 ,  江南大学

发明人： 龚劲松 ,  陆震鸣 ,  汪子凯 ,  许正宏 ,  史劲松 ,  苏畅 ,  冯丹婷

IPC分类号： C12N9/78 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/40 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种半理性设计酶定向进化方法及其在腈水解酶分子改造中的应用，本发明应用ALF‑扫描对腈水解酶的活性口袋进行了几何重塑，以改变底物偏好性并提高催化效率。通过利用该方法结合定点饱和突变，成功获得了4个具有强芳香腈底物偏好性和高催化活性的突变体，分别为W170G，V198L，M197F和F202M。为了探究这4个突变的协同关系，又围绕这4个突变体构建了6个双组合突变体以及4个三组合突变体。通过组合突变，获得了协同增强突变体V198L/W170G，该突变体对芳香腈具有显著的底物偏好性，并且具有更好的催化效率。与野生型相比，其对4种芳香腈底物的比酶活分别提高了11.10、12.10、26.25和2.55倍。

公开(公告)号：CN116004593A

公开(公告)日：2023-04-25

申请号：CN202211559294.2

申请日：2022-12-06

申请人： 宜兴食品与生物技术研究院有限公司 ,  江南大学

发明人： 龚劲松 ,  陆震鸣 ,  汪子凯 ,  许正宏 ,  史劲松 ,  苏畅 ,  冯丹婷

IPC分类号： C12N9/78 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/40 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种半理性设计酶定向进化方法及其在腈水解酶分子改造中的应用，本发明应用ALF‑扫描对腈水解酶的活性口袋进行了几何重塑，以改变底物偏好性并提高催化效率。通过利用该方法结合定点饱和突变，成功获得了4个具有强芳香腈底物偏好性和高催化活性的突变体，分别为W170G，V198L，M197F和F202M。为了探究这4个突变的协同关系，又围绕这4个突变体构建了6个双组合突变体以及4个三组合突变体。通过组合突变，获得了协同增强突变体V198L/W170G，该突变体对芳香腈具有显著的底物偏好性，并且具有更好的催化效率。与野生型相比，其对4种芳香腈底物的比酶活分别提高了11.10、12.10、26.25和2.55倍。