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公开(公告)号:CN101972482A
公开(公告)日:2011-02-16
申请号:CN201010228651.8
申请日:2010-07-16
申请人: 河南农业大学
摘要: 本发明公开了一种鸡传染性喉气管炎双价核酸疫苗,在真核表达载体pIRES的2个多克隆位点中分别插入了ILTV HN1株gB和ChIL-18完整基因,所述双价核酸疫苗共表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因和鸡IL-18基因。本发明采用的真核双表达载体pIRES在启动子下游的MCS A和MCS B的多克隆酶切位点分别插入鸡传染性喉气管炎病毒HN1株gB基因片段和鸡白介素-18基因片段,获得真核双表达质粒pIRES-gB/IL18。避免两种质粒共同免疫时可能存在的细胞摄取不成比例问题,提高局部抗原提成效率,增强局部免疫应答强度,缩短免疫应答潜伏期,为ILTV新型疫苗的研究奠定了基础。
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公开(公告)号:CN103509761B
公开(公告)日:2015-04-08
申请号:CN201310242909.3
申请日:2013-06-19
申请人: 河南农业大学
摘要: 本发明公开了一种表达猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因的重组猪伪狂犬病毒毒株,重组猪伪狂犬病毒(Herpesviridae)毒株,CCTCC NO:V201315。本发明将 PCV2 ORF2基因插入到通用载体PG中,构建了转移质粒PGO。PRV TK-/gG-/gE-病毒接种80-90%融合的单层ST细胞,吸附2h,将质粒PGO转染ST细胞,利用蚀斑纯化技术获得重组病毒PGO株,免疫小鼠。结果显示,商品化PCV2灭活疫苗与重组病毒PGO株免疫组均能诱导鼠产生特异性的体液免疫应答,二者抗体效价明显高于DMEM培养液免疫组且差异显著(p
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公开(公告)号:CN102274523A
公开(公告)日:2011-12-14
申请号:CN201110221729.8
申请日:2011-08-04
申请人: 河南农业大学
摘要: 本发明的技术方案是:一种猪圆环病毒II型核酸疫苗,在真核表达载体pIRES的2个多克隆位点中分别插入了猪圆环病毒II型LY株ORF2和猪IL-18基因,所述核酸疫苗共表达猪圆环病毒II型LY株Cap和猪IL-18蛋白。本发明经PCR、双酶切及测序鉴定,证明成功构建了共表达质粒pIRES-ORF2/PIL18。将构建成功的重组质粒pIRES-ORF2/PIL18用脂质体法转染猪肾PK-15细胞,以RT-PCR和间接免疫荧光检测目的蛋白的表达情况。经RT-PCR检测到两种目的基因的转录;间接免疫荧光试验检测到ORF2蛋白在细胞浆和细胞核中观察到了特异性的亮绿色荧光,证明蛋白得到表达。
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公开(公告)号:CN103952379A
公开(公告)日:2014-07-30
申请号:CN201410104923.1
申请日:2014-03-20
申请人: 河南农业大学
摘要: 本发明公开了一种重组猪伪狂犬病毒毒株,重组猪伪狂犬病毒(Herpesviridae)毒株,CCTCCNO:V201345。本发明是在伪狂犬病毒载体的基础上加入了绿色荧光蛋白标签,构建了表达绿色荧光蛋白gG缺失的通用转移载体PG,含有伪狂犬病病毒自身晚期基因gG启动子、CMV启动子、SV40Poly(A)且上下游侧翼分别为0.8kb和l.7kb,完全可以满足同源重组的需要。EGFP不仅可以作为基因表达的指示剂,而且在其上所带有的多克隆位点内插入了猪IL-18基因,实现了将不同表达框通过一个共同的载体相连而构建,是作为两个表达框单独表达的,其外源基因的表达量与两个表达框连接的方向关系密切。
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公开(公告)号:CN103509761A
公开(公告)日:2014-01-15
申请号:CN201310242909.3
申请日:2013-06-19
申请人: 河南农业大学
摘要: 本发明公开了一种表达猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因的重组猪伪狂犬病毒毒株,重组猪伪狂犬病毒(Herpesviridae)毒株,CCTCCNO:V201315。本发明将PCV2ORF2基因插入到通用载体PG中,构建了转移质粒PGO。PRVTK-/gG-/gE-病毒接种80-90%融合的单层ST细胞,吸附2h,将质粒PGO转染ST细胞,利用蚀斑纯化技术获得重组病毒PGO株,免疫小鼠。结果显示,商品化PCV2灭活疫苗与重组病毒PGO株免疫组均能诱导鼠产生特异性的体液免疫应答,二者抗体效价明显高于DMEM培养液免疫组且差异显著(p
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