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公开(公告)号：CN106754479B
公开(公告)日：2019-11-08
申请号：CN201611053173.5
申请日：2016-11-24
申请人： 浙江大学宁波理工学院
IPC分类号： C12N1/20 , A61K35/747 , A61P19/06 , A23L33/135 , C12R1/225
摘要： 本发明公开了一种弯曲乳杆菌及其应用，该菌株被命名为弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)5‑1，保藏号为CGMCC No.12891。该菌株具有高效降解嘌呤核苷的能力，同时可以耐受人体正常条件下的酸性环境和胆盐浓度，可以在肠道内分解摄入食物中的嘌呤核苷，从而减少小肠对嘌呤核苷的吸收。因此弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)5‑1是开发辅助治疗高尿酸血症的微生态菌剂的良好菌株。
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公开(公告)号：CN107177642B
公开(公告)日：2019-10-29
申请号：CN201710438866.4
申请日：2017-06-12
申请人： 浙江大学宁波理工学院
摘要： 本发明公开了一种咪唑‑4‑乙酸的生物合成方法，该方法包括以下步骤：以L‑组氨酸为底物，在膜联L‑氨基酸脱氨酶的催化下，进行脱氨反应，得到含有中间产物3‑(4‑咪唑)‑2‑氧丙酸的反应液；向所述反应液中加入过氧化氢溶液，进行反应，反应结束后，得到咪唑‑4‑乙酸。本发明方法步骤简单，反应条件温和，原料来源广泛、生物催化剂易于制备、设备要求低，底物转化率高，且不需要使用有机溶剂和有毒试剂，相对于现有的化学法具有高效、成本低和环境友好的特点。
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公开(公告)号：CN103789246B
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201410005932.5
申请日：2014-01-03
申请人： 浙江大学宁波理工学院
摘要： 本发明公开了一种透性化谷氨酸脱羧酶工程菌及其制备方法，所述方法包括：将已表达谷氨酸脱羧酶的谷氨酸脱羧酶工程菌菌体悬浮于水或缓冲液中，50～70℃处理5～40min后，收集菌体，得到所述的透性化谷氨酸脱羧酶工程菌；其中，所述的谷氨酸脱羧酶工程菌包括宿主细胞和转入宿主细胞的谷氨酸脱羧酶基因，所述的宿主细胞为大肠杆菌。本发明还提供了所述方法得到的透性化谷氨酸脱羧酶工程菌。本发明的方法，简便、成本低，易于操作，可有效提高菌体的谷氨酸脱羧酶表观催化活力。
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公开(公告)号：CN105462949A
公开(公告)日：2016-04-06
申请号：CN201510952734.4
申请日：2015-12-17
申请人： 浙江大学宁波理工学院
CPC分类号： C12N9/88 , C12P13/00 , C12Y401/01015
摘要： 本发明公开了一种谷氨酸脱羧酶突变体及其制备方法和用途，该突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还公开了一种包含编码谷氨酸脱羧酶突变体基因的表达单元、重组质粒和转化子。本发明根据与嗜热古细菌(Thermococcus kodakarensis)GAD氨基酸序列的比对信息，采用定点突变的方法在短乳杆菌GAD对应的氨基酸位点引入脯氨酸残基，通过理性设计提高GAD的热稳定性，该突变酶在催化L-谷氨酸或其钠盐生成γ-氨基丁酸的过程中具有更好的热稳定性，有利于GABA的工业化生产。
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公开(公告)号：CN103031322B
公开(公告)日：2014-10-22
申请号：CN201110297156.7
申请日：2011-09-30
申请人： 浙江大学宁波理工学院
摘要： 本发明涉及一种谷氨酸脱羧酶热稳定变体G311P基因，其核苷酸序列在第311位有定点突变。研究发现，此位点突变后得到的变体基因编码的谷氨酸脱羧酶的热稳定性有所增强。本发明通过在编码野生GAD酶基因基础上进行定点突变，提高了其对应变体酶在在60℃和70℃下的热稳定性。随着酶热稳定性的提高，在工业生产过程中可以采用更高的操作温度，以提高反应速率、增加底物溶解度，有利于利用该酶通过生物转化生产GABA。
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公开(公告)号：CN107312787A
公开(公告)日：2017-11-03
申请号：CN201710586367.X
申请日：2017-07-18
申请人： 浙江大学宁波理工学院
摘要： 本发明公开了一种融合蛋白基因、工程菌及其在制备9α-羟基-雄烯二酮中的应用，其中，所述融合蛋白基因包括编码3-甾酮-9α-羟基化酶的基因和编码细胞色素P450 BM-3酶中黄素域的基因。本发明将3-甾酮-9α-羟基化酶在大肠杆菌中异源表达，并通过基因重组技术，将3-甾酮-9α-羟基化酶与细胞色素P450 BM-3酶的黄素域进行融合表达，得到融合蛋白KshA-P450，并使用含有该融合蛋白的重组工程菌催化底物雄烯二酮制备9α-羟基-雄烯二酮，不仅提高了比活力，同时也提高了转化率。
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公开(公告)号：CN107177642A
公开(公告)日：2017-09-19
申请号：CN201710438866.4
申请日：2017-06-12
申请人： 浙江大学宁波理工学院
摘要： 本发明公开了一种咪唑‑4‑乙酸的生物合成方法，该方法包括以下步骤：以L‑组氨酸为底物，在膜联L‑氨基酸脱氨酶的催化下，进行脱氨反应，得到含有中间产物3‑(4‑咪唑)‑2‑氧丙酸的反应液；向所述反应液中加入过氧化氢溶液，进行反应，反应结束后，得到咪唑‑4‑乙酸。本发明方法步骤简单，反应条件温和，原料来源广泛、生物催化剂易于制备、设备要求低，底物转化率高，且不需要使用有机溶剂和有毒试剂，相对于现有的化学法具有高效、成本低和环境友好的特点。
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公开(公告)号：CN106754479A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201611053173.5
申请日：2016-11-24
申请人： 浙江大学宁波理工学院
IPC分类号： C12N1/20 , A61K35/747 , A61P19/06 , A23L33/135 , C12R1/225
摘要： 本发明公开了一种弯曲乳杆菌及其应用，该菌株被命名为弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)5‑1，保藏号为CGMCC No.12891。该菌株具有高效降解嘌呤核苷的能力，同时可以耐受人体正常条件下的酸性环境和胆盐浓度，可以在肠道内分解摄入食物中的嘌呤核苷，从而减少小肠对嘌呤核苷的吸收。因此弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)5‑1是开发辅助治疗高尿酸血症的微生态菌剂的良好菌株。
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公开(公告)号：CN107312787B
公开(公告)日：2020-04-14
申请号：CN201710586367.X
申请日：2017-07-18
申请人： 浙江大学宁波理工学院
摘要： 本发明公开了一种融合蛋白基因、工程菌及其在制备9α‑羟基‑雄烯二酮中的应用，其中，所述融合蛋白基因包括编码3‑甾酮‑9α‑羟基化酶的基因和编码细胞色素P450 BM‑3酶中黄素域的基因。本发明将3‑甾酮‑9α‑羟基化酶在大肠杆菌中异源表达，并通过基因重组技术，将3‑甾酮‑9α‑羟基化酶与细胞色素P450 BM‑3酶的黄素域进行融合表达，得到融合蛋白KshA‑P450，并使用含有该融合蛋白的重组工程菌催化底物雄烯二酮制备9α‑羟基‑雄烯二酮，不仅提高了比活力，同时也提高了转化率。
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公开(公告)号：CN103031323B
公开(公告)日：2014-10-08
申请号：CN201110297904.1
申请日：2011-09-30
申请人： 浙江大学宁波理工学院
摘要： 本发明涉及一种谷氨酸脱羧酶热稳定变体G56P基因，其核苷酸序列在第56位有定点突变。研究发现，此位点突变后得到的变体基因编码的谷氨酸脱羧酶的热稳定性有所增强。本发明通过在编码野生GAD酶基因基础上进行定点突变，提高了其对应变体酶在在60℃和70℃下的热稳定性。随着酶热稳定性的提高，在工业生产过程中可以采用更高的操作温度，以提高反应速率、增加底物溶解度，有利于利用该酶通过生物转化生产GABA。
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