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公开(公告)号：CN107973841B
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN201611208261.8
申请日：2016-12-23
申请人： 浙江海隆生物科技有限公司
摘要： 本发明公开了一种CHO细胞表达的重组牛病毒性腹泻病毒E2蛋白及亚单位疫苗的制备方法和应用，属于动物疫苗与兽用生物制品技术领域。其目的在于提供一种可大规模工业化生产牛病毒性腹泻病毒重组亚单位疫苗的制备方法。本发明提供的重组亚单位疫苗制备方法包括以下步骤：1)克隆包含E2蛋白编码基因的真核表达载体；2)转染CHO细胞，通过选择、筛选和驯化的方式得到悬浮稳定高效表达E2蛋白的CHO细胞株；3)发酵培养2)中所述的细胞株，纯化后得到重组E2蛋白；4)将重组E2蛋白与ISA 201 VG充分混匀得到重组亚单位疫苗。本发明提供的方法能够从细胞培养上清中收获目的蛋白，且产量高达500mg/L，不仅缩短蛋白纯化时间和简化疫苗生产步骤，也大大降低疫苗生产成本。
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公开(公告)号：CN116813720A
公开(公告)日：2023-09-29
申请号：CN202310532797.9
申请日：2017-07-07
申请人： 浙江海隆生物科技有限公司
IPC分类号： C07K14/03 , C12N15/38 , C12N15/85 , A61K39/245 , A61P31/22
摘要： 本发明公开了一种猪伪狂犬病毒gD亚单位蛋白及猪伪狂犬病毒亚单位疫苗和应用，所述疫苗包括(1)猪伪狂犬病毒gD蛋白，所述gD蛋白的浓度为30～200μg/头份；(2)猪GM‑CSF蛋白，所述GM‑CSF蛋白的浓度为10～80μg/头份；(3)药学上可以接受的佐剂。制备该疫苗中gD蛋白的方法包括：1)将密码子优化后的猪伪狂犬病毒gD蛋白基因克隆到真核表达载体中得到含有猪伪狂犬病毒gD蛋白编码基因的重组质粒；2)再将含有猪伪狂犬病毒gD蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中；3)通过培养、筛选、驯化2)中所述的CHO细胞株得到高度表达的细胞株；4)发酵培养3)中所述的细胞株，纯化后得到重组猪伪狂犬病毒gD蛋白。该疫苗具有可工业化生产、成本低、质控容易、免疫效果好等优点。
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公开(公告)号：CN109280642B
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN201710602362.1
申请日：2017-07-21
申请人： 浙江海隆生物科技有限公司
摘要： 本发明公开了一种CHO细胞株及其制备方法和使用该CHO细胞株制备猪圆环病毒2型Cap蛋白及其应用，所述制备CHO细胞株方法包括：1)将密码子优化后的猪圆环病毒2型Cap蛋白基因克隆到真核表达载体中得到含有猪圆环病毒2型Cap蛋白编码基因的重组质粒；2)再将含有猪圆环病毒2型Cap蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中；3)通过培养、筛选、驯化2)中所述的CHO细胞株得到高度表达的细胞株。所述使用该CHO细胞株制备猪圆环病毒2型Cap蛋白的方法为发酵培养所述的细胞株，纯化后得到重组猪圆环病毒2型Cap蛋白。使用该CHO细胞株制备猪圆环病毒2型Cap蛋白具有可工业化生产、成本低、质控容易，且制备的蛋白具有免疫效果好的优点。
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公开(公告)号：CN109280642A
公开(公告)日：2019-01-29
申请号：CN201710602362.1
申请日：2017-07-21
申请人： 浙江海隆生物科技有限公司
摘要： 本发明公开了一种CHO细胞株及其制备方法和使用该CHO细胞株制备猪圆环病毒2型Cap蛋白及其应用，所述制备CHO细胞株方法包括：1)将密码子优化后的猪圆环病毒2型Cap蛋白基因克隆到真核表达载体中得到含有猪圆环病毒2型Cap蛋白编码基因的重组质粒；2)再将含有猪圆环病毒2型Cap蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中；3)通过培养、筛选、驯化2)中所述的CHO细胞株得到高度表达的细胞株。所述使用该CHO细胞株制备猪圆环病毒2型Cap蛋白的方法为发酵培养所述的细胞株，纯化后得到重组猪圆环病毒2型Cap蛋白。使用该CHO细胞株制备猪圆环病毒2型Cap蛋白具有可工业化生产、成本低、质控容易，且制备的蛋白具有免疫效果好的优点。
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公开(公告)号：CN107973840A
公开(公告)日：2018-05-01
申请号：CN201710023620.0
申请日：2017-01-13
申请人： 浙江海隆生物科技有限公司
IPC分类号： C07K14/06 , C12N15/85 , C12N5/10 , A61K39/265 , A61P31/22 , G01N33/569
摘要： 本发明公开了一种CHO细胞表达的重组牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白及亚单位疫苗的制备方法和应用，并证明该疫苗能够在牛体内产生较强的体液免疫，属于动物疫苗与兽用生物制品技术领域，其目的在于提供一种可大规模工业化生产牛传染性鼻气管炎病毒重组亚单位疫苗的制备方法，所述重组亚单位疫苗制备方法包括以下步骤：1)克隆包含gD蛋白编码基因的真核表达载体；2)转染CHO细胞，通过选择、筛选和驯化的方式得到悬浮稳定高效表达gD蛋白的CHO细胞株；3)发酵培养2)中所述的细胞株，纯化后得到重组gD蛋白；4)将重组gD蛋白与ISA 201 VG充分混匀得到重组亚单位疫苗。本发明提供的方法能够从细胞培养上清中收获目的蛋白，且产量高达2-3g/L，不仅缩短蛋白纯化时间和简化疫苗生产步骤，也大大降低疫苗生产成本。
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公开(公告)号：CN109206491A
公开(公告)日：2019-01-15
申请号：CN201710551363.8
申请日：2017-07-07
申请人： 浙江海隆生物科技有限公司
IPC分类号： C07K14/03 , C12N15/38 , C12N15/85 , A61K39/245 , A61P31/22
摘要： 本发明公开了一种制备猪伪狂犬病毒gD蛋白的方法及猪伪狂犬病毒亚单位疫苗和应用，所述疫苗包括(1)猪伪狂犬病毒gD蛋白，所述gD蛋白的浓度为30～200μg/头份；(2)猪GM-CSF蛋白，所述GM-CSF蛋白的浓度为10～80μg/头份；(3)药学上可以接受的佐剂。制备该疫苗中gD蛋白的方法包括：1)将密码子优化后的猪伪狂犬病毒gD蛋白基因克隆到真核表达载体中得到含有猪伪狂犬病毒gD蛋白编码基因的重组质粒；2)再将含有猪伪狂犬病毒gD蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中；3)通过培养、筛选、驯化2)中所述的CHO细胞株得到高度表达的细胞株；4)发酵培养3)中所述的细胞株，纯化后得到重组猪伪狂犬病毒gD蛋白。该疫苗具有可工业化生产、成本低、质控容易、免疫效果好等优点。
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公开(公告)号：CN107973841A
公开(公告)日：2018-05-01
申请号：CN201611208261.8
申请日：2016-12-23
申请人： 浙江海隆生物科技有限公司
摘要： 本发明公开了一种CHO细胞表达的重组牛病毒性腹泻病毒E2蛋白及亚单位疫苗的制备方法和应用，属于动物疫苗与兽用生物制品技术领域。其目的在于提供一种可大规模工业化生产牛病毒性腹泻病毒重组亚单位疫苗的制备方法。本发明提供的重组亚单位疫苗制备方法包括以下步骤：1)克隆包含E2蛋白编码基因的真核表达载体；2)转染CHO细胞，通过选择、筛选和驯化的方式得到悬浮稳定高效表达E2蛋白的CHO细胞株；3)发酵培养2)中所述的细胞株，纯化后得到重组E2蛋白；4)将重组E2蛋白与ISA 201 VG充分混匀得到重组亚单位疫苗。本发明提供的方法能够从细胞培养上清中收获目的蛋白，且产量高达500mg/L，不仅缩短蛋白纯化时间和简化疫苗生产步骤，也大大降低疫苗生产成本。
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