公开(公告)号：CN109055381A

公开(公告)日：2018-12-21

申请号：CN201810897903.2

申请日：2018-08-08

申请人： 淮海工学院 ,  江苏省海洋资源开发研究院(连云港)

发明人： 吕明生 ,  王淑军 ,  谷利德 ,  房耀维 ,  刘姝 ,  陈丽 ,  任伟 ,  闫婉丽

IPC分类号： C12N15/115 ,  G01N33/569

CPC分类号： C12N15/115 ,  G01N33/56911

摘要： 本发明是一种用于鳗弧菌（Vibrio anguillarum）特异性识别的ssDNA核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列为Apt‑Va01和Apt‑Va02中所示的DNA片段的核苷酸序列。本发明还详细阐述了对该核酸适配体的筛选方法。本发明提供了一条特异性强，亲和力高，检测限低的鳗弧菌核酸适配体，能够快速的对鳗弧菌菌体细胞进行检测，可被应用于食品加工、水产养殖、医学诊断、环境检测等过程中鳗弧菌的快速检测。

公开(公告)号：CN109097365A

公开(公告)日：2018-12-28

申请号：CN201810950055.7

申请日：2018-08-20

申请人： 淮海工学院

发明人： 王淑军 ,  吕明生 ,  闫婉丽 ,  谷利德 ,  房耀维 ,  陈丽 ,  任伟

IPC分类号： C12N15/115 ,  G01N33/569

摘要： 本发明是一种用于创伤弧菌（Vibrio vulnificus）特异性识别的ssDNA核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列为Apt-Vv01所示的DNA片段的核苷酸序列。本发明还提供识别创伤弧菌的核酸适配体的筛选方法，并根据其对创伤弧菌菌体亲和力的大小来对其进行性质鉴定和应用。本发明核酸适配体由149个碱基构成，拥有特殊的二级结构。所述的核酸适配体可应用于医学诊断、环境检测、食品加工、水产养殖等中创伤弧菌的快速检测。有效的保护水体免遭该病原菌污染，特别在诊断、水产养殖以及水体防污方面具有广泛的应用价值。

公开(公告)号：CN109182455A

公开(公告)日：2019-01-11

申请号：CN201810897905.1

申请日：2018-08-08

申请人： 淮海工学院 ,  江苏省海洋资源开发研究院(连云港)

发明人： 王淑军 ,  吕明生 ,  闫婉丽 ,  房耀维 ,  刘姝 ,  陈丽 ,  谷利德

IPC分类号： C12Q1/6811

摘要： 本发明是一种蛋白质核酸适配体的筛选方法。该方法将蛋白质包埋在聚苯乙烯96孔板或其它吸附蛋白质的器皿的表面；加入胰蛋白酶或蛋白酶消化降解蛋白质，使蛋白质与寡核苷酸结合复合物脱离容器表面，通过加热灭活蛋白酶并释放ssDNA；与蛋白特异性接合的ssDNA被富集，筛选得到亲和力高的适配体。本发明筛选方法无需对筛选文库和PCR引物进行修饰，在节约成本的同时不会对靶标结构有任何改变，从而增加了筛选出的适配体的特异性；它可以使与蛋白特异性接合的ssDNA被富集，提高了筛选效率，筛选得到的适配体的亲和力高。用于以蛋白质为靶标的核酸适配体筛选。

公开(公告)号：CN109628457B

公开(公告)日：2021-12-10

申请号：CN201910108955.1

申请日：2019-02-03

申请人： 淮海工学院

发明人： 王淑军 ,  闫婉丽 ,  谷利德 ,  吕明生 ,  任伟 ,  房耀维 ,  刘姝

IPC分类号： C12N15/115 ,  C12N15/10 ,  G01N33/569

摘要： 本发明是一种单链DNA核酸适配体，属病原微生物检测技术领域。具体是用于幽门螺旋杆菌特异性检测的核酸适配体。本发明单链DNA核酸适配体能够高亲和性、高特异性结合幽门螺旋杆菌。本发明还公开了该核酸适配体的筛选方法与用途。本发明单链DNA核酸适配体具有80个碱基和特殊的二级结构，其对幽门螺旋杆菌菌体表面蛋白的亲和力达到26.48±5.72 nM。通过检测其对幽门螺旋杆菌的结合率、荧光强度和荧光显微成像确定它能特异性作用于幽门螺旋杆菌。

公开(公告)号：CN110106178A

公开(公告)日：2019-08-09

申请号：CN201910413737.9

申请日：2019-05-17

申请人： 淮海工学院 ,  江苏省海洋资源开发研究院(连云港)

发明人： 王淑军 ,  吕明生 ,  谷利德 ,  闫婉丽 ,  房耀维 ,  刘姝 ,  焦豫良

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12Q1/689 ,  C12Q1/04 ,  C12Q1/6806 ,  C12R1/63

摘要： 本发明是一种用于鳗弧菌特异性识别和RNA切割的DNAzyme，所述的DNAzyme为2条，分别为VAE-1和VAE-2。本发明利用磁性分离技术和体外筛选技术筛选得到的RNA特异性切割的DNAzyme。本发明还对该DNAzyme进行了碱基突变改造，共计得到6条具有活性的突变体DNAzymes。本发明还公开了该DNAzyme的筛选用途。本发明提供了多条特异性强，切割能力高，检测线低的鳗弧菌依赖性DNA-zyme，能够快速、有效的对鳗弧菌进行检测，可广泛的应用于与水产养殖中鳗弧菌病原微生物的快速检测，有效地保护水体免遭该病原菌污染，在水产养殖以及水体防污方面具有广泛的应用价值。

公开(公告)号：CN109628457A

公开(公告)日：2019-04-16

申请号：CN201910108955.1

申请日：2019-02-03

申请人： 淮海工学院

发明人： 王淑军 ,  闫婉丽 ,  谷利德 ,  吕明生 ,  任伟 ,  房耀维 ,  刘姝

IPC分类号： C12N15/115 ,  C12N15/10 ,  G01N33/569

CPC分类号： C12N15/115 ,  C12N15/111 ,  C12N2310/16 ,  C12N2320/13 ,  G01N33/56911 ,  G01N2333/20

摘要： 本发明是一种单链DNA核酸适配体，属病原微生物检测技术领域。具体是用于幽门螺旋杆菌特异性检测的核酸适配体。本发明单链DNA核酸适配体能够高亲和性、高特异性结合幽门螺旋杆菌。本发明还公开了该核酸适配体的筛选方法与用途。本发明单链DNA核酸适配体具有80个碱基和特殊的二级结构，其对幽门螺旋杆菌菌体表面蛋白的亲和力达到26.48±5.72 nM。通过检测其对幽门螺旋杆菌的结合率、荧光强度和荧光显微成像确定它能特异性作用于幽门螺旋杆菌。