公开(公告)号：CN109852633A

公开(公告)日：2019-06-07

申请号：CN201910212588.X

申请日：2019-03-20

申请人： 淮海工学院 ,  江苏愚公生命科技有限公司

发明人： 龚雪梅 ,  薛勇 ,  罗志丹 ,  胡艳红 ,  张慧铭 ,  韩挺翰 ,  张晨蕾

IPC分类号： C12N15/75 ,  C12N15/56 ,  C12N9/22 ,  C12Q1/34

摘要： 本发明公开一种基于芽孢杆菌表达系统高效表达灵杆菌非特异性核酸酶的方法，其特征在于：包括以芽孢杆菌作为宿主表达体系，利用芽孢杆菌胞外分泌能力实现灵杆菌非特异性核酸酶的高效表达；本发明重组表达出的灵杆菌非特异性核酸酶，比活力是目前商业化产品的3倍，本发明选用的芽孢杆菌分泌表达系统，从根本上解决了由其他表达系统自身特性所引入的内毒素及糖基化修饰等影响酶活或限制其应用的缺陷，高效的分泌型表达无需破碎细胞，纯化步骤更为简便，可以线性放大，便于规模性生产，值得推广。

公开(公告)号：CN107557372A

公开(公告)日：2018-01-09

申请号：CN201710764317.6

申请日：2017-08-30

申请人： 江苏愚公生命科技有限公司

发明人： 张坤晓 ,  龚雪梅 ,  韩挺翰 ,  许恒皓

IPC分类号： C12N15/54 ,  C12N15/74 ,  C12N15/66

摘要： 本发明是一种用于表达限制性内切酶SacI的甲基化保护菌株的筛选方法，它通过甲基转移酶M.AluI的重组表达菌株的建立、限制酶SacI的重组表达等步骤，将测序正确的重组表达质粒pBAD-R.SacI转化感受态细胞进行筛选培养，获得限制酶SacI的重组表达菌株；该菌株经扩大培养后，以阿拉伯糖诱导，获得限制酶SacI的重组蛋白。本发明方法实现了限制酶SacI的高效重组表达；利用阿拉伯糖操纵子表达系统对本底表达的严苛控制进行限制酶SacI的重组表达；抵抗限制酶SacI对宿主基因组DNA的酶切，方法稳定且高效；筛选出的M.AluI甲基化保护菌株同样可应用于其他具有类似识别位点的限制酶的重组表达。

公开(公告)号：CN107760697A

公开(公告)日：2018-03-06

申请号：CN201710765015.0

申请日：2017-08-30

申请人： 江苏愚公生命科技有限公司

发明人： 张坤晓 ,  韩挺翰 ,  龚雪梅 ,  许恒皓

IPC分类号： C12N15/54 ,  C12N15/74 ,  C12N15/66

CPC分类号： C12N9/1007 ,  C12N9/22 ,  C12N15/66 ,  C12N15/74

摘要： 一种用于表达限制性内切酶FspI的甲基化保护菌株的筛选方法，通过甲基转移酶M.HhaI基因的获取，构建甲基转移酶M.HhaI的重组表达菌株，甲基化保护菌株的筛选，限制性内切酶FspI基因的获取，构建限制性内切酶FspI的重组表达菌株；再限制酶FspI的重组表达，获得限制酶FspI的重组表达菌株。本发明方法实现了限制酶FspI的高效重组表达；利用乳糖操纵子表达系统进行限制酶FspI的重组表达；抵抗限制酶FspI对宿主基因组DNA的酶切，相对无甲基化保护的表达系统，可稳定且高效进行限制酶FspI的重组表达；筛选出的M.HhaI甲基化保护菌株同样可应用于其他具有类似识别位点的限制酶的重组表达。

公开(公告)号：CN105810072A

公开(公告)日：2016-07-27

申请号：CN201610175080.3

申请日：2016-03-25

申请人： 淮海工学院

发明人： 许恒皓 ,  张坤晓 ,  李婷婷 ,  韩挺翰 ,  程艺 ,  陈凯

IPC分类号： G09B23/26 ,  C07K1/30

CPC分类号： G09B23/26 ,  C07K1/306

摘要： 本发明公开了一种蛋白质结晶的教学试剂盒，该试剂盒内的物品包括3种不同的蛋白沉淀剂，溶菌酶粉末，稀释缓冲液，染色剂，过滤器，结晶平皿和封口膜。本发明还涉及应用该教学试剂盒进行蛋白质结晶的方法。本发明教学试剂盒针对生物科学教学中的溶菌酶结晶实验，将实验所需的试剂和材料装入试剂盒内，降低了实验准备工作强度，该教学试剂盒操作简便，有助于实验人员在较短的时间内掌握并完成蛋白质结晶实验，提高了实验效率，节约了成本，可以在生物基础教学实验中进行大规模推广。

公开(公告)号：CN106480076A

公开(公告)日：2017-03-08

申请号：CN201611048568.6

申请日：2016-11-25

申请人： 淮海工学院

发明人： 高嵩 ,  尹欣 ,  王佩 ,  陈凯 ,  韩挺翰 ,  孙峰 ,  许恒皓

IPC分类号： C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N9/22

摘要： 本发明是一种利用甲基化酶的保护高效重组表达限制性内切酶的方法，其特征在于：所述的甲基化酶是M.Sss I；所述限制性内切酶D选自：AatII、AciI、AclI、AfeI、AgeI、AscI、AsiSI、AvaI、BceAI、BmgBI、BsaAI、BsaHI、BsiEI、BsiWI、BsmBI、BspDI、BspEI、BsrFI、BssHII、BstBI、BstUI、BtgZI、ClaI、EagI、FauI、FseI、FspI、HaeII、HgaI、HhaI、HinP1I、HpaII、Hpy99I、HpyCH4IV、KasI、MluI、NaeI、NarI、NgoMIV、NotI、NruI、Nt.BsmAI、Nt.CviPII、PaeR7I、PluTI、PmlI、PvuI、RsrII、SacII、SalI、SfoI、SgrAI、SmaI、SnaBI、TliI、TspMI、XhoI、XmaI、ZraI。本发明方法重组工程菌的构建过程中直接使用广谱保护型甲基化酶M.Sss I，无需针对单个限制性内切酶进行繁琐的甲基化酶基因筛选，应用范围广泛，大大简化了重组表达过程。