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公开(公告)号：CN107002080A
公开(公告)日：2017-08-01
申请号：CN201580068010.1
申请日：2015-12-09
申请人： 深圳华大基因研究院 , 深圳华大基因科技有限公司
IPC分类号： C12N15/11
摘要： 提供一种基于多重PCR的目标区域富集方法和试剂，该方法包括：在含待富集目标区域的核酸片段两端分别连接第一接头和第二接头，得到接头连接产物；使用特异性结合第一接头的第一引物和特异性结合第二接头的第二引物，对接头连接产物进行PCR扩增，得到扩增产物，其中第一引物或第二引物具有第一亲和标记；通过固相载体捕获扩增产物中带有第一亲和标记的单链；以捕获的单链为模板，使用第三引物进行单引物线性扩增；以线性扩增产物为模板，使用第三引物和第一引物进行指数扩增，得到包含目标区域的产物。
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公开(公告)号：CN105714383A
公开(公告)日：2016-06-29
申请号：CN201510971452.9
申请日：2015-12-22
申请人： 深圳华大基因研究院 , 深圳华大基因科技有限公司
摘要： 本发明公开了一种基于分子反向探针的测序文库构建方法和试剂，该方法包括：用分子反向探针与变性核酸进行退火杂交，分子反向探针包括5’端的锚定序列和3’端的延伸序列以及二者之间的测序接头序列，锚定序列和延伸序列分别与变性核酸中的目标区域两端的序列反向互补；以目标区域为模板，从3’端的延伸序列开始进行聚合反应，生成目标区域的互补序列；将5’端的锚定序列与目标区域的互补序列连接形成环状核酸分子；使用核酸外切酶消化未环化的线性分子，得到含有目标区域的单链环状分子。将得到的单链环状分子进行测序，从而实现对目标区域捕获测序。本发明的方法实现将单链环状文库构建和目标区域捕获融为一体，从而大大缩减建库流程和周期。
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公开(公告)号：CN105714383B
公开(公告)日：2018-01-23
申请号：CN201510971452.9
申请日：2015-12-22
申请人： 深圳华大基因研究院 , 深圳华大基因科技有限公司
IPC分类号： C40B50/06 , C12Q1/6869
摘要： 本发明公开了一种基于分子反向探针的测序文库构建方法和试剂，该方法包括：用分子反向探针与变性核酸进行退火杂交，分子反向探针包括5’端的锚定序列和3’端的延伸序列以及二者之间的测序接头序列，锚定序列和延伸序列分别与变性核酸中的目标区域两端的序列反向互补；以目标区域为模板，从3’端的延伸序列开始进行聚合反应，生成目标区域的互补序列；将5’端的锚定序列与目标区域的互补序列连接形成环状核酸分子；使用核酸外切酶消化未环化的线性分子，得到含有目标区域的单链环状分子。将得到的单链环状分子进行测序，从而实现对目标区域捕获测序。本发明的方法实现将单链环状文库构建和目标区域捕获融为一体，从而大大缩减建库流程和周期。
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公开(公告)号：CN106192018A
公开(公告)日：2016-12-07
申请号：CN201510229173.5
申请日：2015-05-07
申请人： 深圳华大基因研究院
摘要： 本发明公开了一种锚定巢式多重PCR富集DNA目标区域的方法和试剂盒，该方法包括：将DNA进行末端修复和接头序列的连接，其中接头序列包括互补的长序列和短序列，长序列在靠近连接端处与短序列互补，其它部分中包含一段标签序列；对连接产物进行第一轮多重PCR反应，其中上游引物为其至少一部分与标签序列相同的锚定引物，下游引物包括多条特异性结合到目标区域上的序列；对第一轮多重PCR反应得到的产物进行第二轮多重PCR反应，其中上游引物为锚定引物，下游引物包括多条5’-端具有测序引物序列、3’-端特异性结合到目标区域上的序列，最后得到目标区域文库。本发明的方法具有快速、低成本和高通量的特点。
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公开(公告)号：CN106715691A
公开(公告)日：2017-05-24
申请号：CN201480082154.8
申请日：2014-10-14
申请人： 深圳华大基因科技有限公司
摘要： 提供一种转座酶打断核酸并加接头的方法和试剂。该方法包括如下步骤：使用转座酶包埋复合体对核酸进行随机打断，其中转座酶包埋复合体包含转座酶和含转座酶识别序列的第一接头，打断的核酸两端连接第一接头并且形成缺口；通过纯化或化学试剂处理的方式，去除体系中的转座酶对后续反应的影响；使用连接酶在缺口处连接上第二接头，第二接头的序列不同于第一接头；使用分别靶向结合第一接头和第二接头的引物进行PCR反应，得到两端分别连接有不同接头序列的产物。
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公开(公告)号：CN107075731A
公开(公告)日：2017-08-18
申请号：CN201480081852.6
申请日：2014-10-14
申请人： 深圳华大基因科技有限公司
摘要： 本发明提供了一种核酸单链环状文库的构建方法和试剂。所述方法包括：使用转座酶包埋复合体随机打断核酸并连接第一接头；在缺口处连接第二接头；进行第一PCR反应，其中一条引物5’端具有第一亲和标记，得到两端连接不同接头序列的产物；将产物与具有第二亲和标记的固相载体结合；变性，分离无亲和标记的单链；对单链进行环化。
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公开(公告)号：CN107075560A
公开(公告)日：2017-08-18
申请号：CN201480082159.0
申请日：2014-10-14
申请人： 深圳华大基因科技有限公司
摘要： 本发明公开了一种核酸的转座酶打断一站式处理方法及试剂。本发明的方法，包括如下步骤：使用转座酶包埋复合体对核酸进行随机打断，其中转座酶包埋复合体包含转座酶和含转座酶识别序列的第一接头；加入第一试剂进行处理，打破转座酶与核酸的靶序列的吸附作用；加入第二试剂进行处理，减弱第一试剂对后续酶促反应的影响；以第二试剂处理后的产物为模板成分进行PCR反应，得到打断的核酸片段两端连接有接头的PCR产物。
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