公开(公告)号：CN105714383B

公开(公告)日：2018-01-23

申请号：CN201510971452.9

申请日：2015-12-22

Applicant: 深圳华大基因研究院 ,  深圳华大基因科技有限公司

Inventor： 耿春雨 ,  于源 ,  李梅艳 ,  郭晶 ,  蒋慧 ,  章文蔚 ,  郭荣荣 ,  傅书锦 ,  田凯 ,  安丹 ,  贺玲瑜

IPC: C40B50/06 ,  C12Q1/6869

Abstract: 本发明公开了一种基于分子反向探针的测序文库构建方法和试剂，该方法包括：用分子反向探针与变性核酸进行退火杂交，分子反向探针包括5’端的锚定序列和3’端的延伸序列以及二者之间的测序接头序列，锚定序列和延伸序列分别与变性核酸中的目标区域两端的序列反向互补；以目标区域为模板，从3’端的延伸序列开始进行聚合反应，生成目标区域的互补序列；将5’端的锚定序列与目标区域的互补序列连接形成环状核酸分子；使用核酸外切酶消化未环化的线性分子，得到含有目标区域的单链环状分子。将得到的单链环状分子进行测序，从而实现对目标区域捕获测序。本发明的方法实现将单链环状文库构建和目标区域捕获融为一体，从而大大缩减建库流程和周期。

公开(公告)号：CN105714383A

公开(公告)日：2016-06-29

申请号：CN201510971452.9

申请日：2015-12-22

Applicant: 深圳华大基因研究院 ,  深圳华大基因科技有限公司

Inventor： 耿春雨 ,  于源 ,  李梅艳 ,  郭晶 ,  蒋慧 ,  章文蔚 ,  郭荣荣 ,  傅书锦 ,  田凯 ,  安丹 ,  贺玲瑜

IPC: C40B50/06 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一种基于分子反向探针的测序文库构建方法和试剂，该方法包括：用分子反向探针与变性核酸进行退火杂交，分子反向探针包括5’端的锚定序列和3’端的延伸序列以及二者之间的测序接头序列，锚定序列和延伸序列分别与变性核酸中的目标区域两端的序列反向互补；以目标区域为模板，从3’端的延伸序列开始进行聚合反应，生成目标区域的互补序列；将5’端的锚定序列与目标区域的互补序列连接形成环状核酸分子；使用核酸外切酶消化未环化的线性分子，得到含有目标区域的单链环状分子。将得到的单链环状分子进行测序，从而实现对目标区域捕获测序。本发明的方法实现将单链环状文库构建和目标区域捕获融为一体，从而大大缩减建库流程和周期。

公开(公告)号：CN106661575A

公开(公告)日：2017-05-10

申请号：CN201480081525.0

申请日：2014-10-14

Applicant: 深圳华大基因科技有限公司

Inventor： 江媛 ,  耿春雨 ,  赵霞 ,  傅书锦 ,  贺玲瑜 ,  李雅乔 ,  苏小珊 ,  吴凡子 ,  章文蔚 ,  蒋慧 ,  阿莱克谢耶夫安德烈 ,  徳马纳克拉多杰

IPC: C12N15/11 ,  C40B50/06 ,  C40B40/06 ,  C12Q1/68

Abstract: 提供了一种接头元件和使用该接头元件构建测序文库的方法，所述接头元件由接头A和接头B组成；接头A由一条核酸长链与一条核酸短链互补配对而成，长链5’端具有磷酸修饰，短链3’端为封闭修饰，短链中具有酶作用位点；接头B为一条核酸单链，其3’端能与接头A长链5’端互补配对。使用本发明的接头元件构建测序文库时，在保证接头连接方向性的同时，解决了片段互连、接头自连、连接效率低的问题，减少了步骤间的纯化反应，缩短了连接时间，降低了成本。

公开(公告)号：CN108085315A

公开(公告)日：2018-05-29

申请号：CN201710183553.9

申请日：2017-03-24

Applicant: 深圳华大基因科技有限公司

Inventor： 张艳艳 ,  江媛 ,  李巧玲 ,  魏汉敏 ,  赵霞 ,  董超 ,  沈寒婕 ,  田凯 ,  于竞 ,  傅书锦 ,  苏小珊 ,  耿春雨

IPC: C12N15/10 ,  C40B40/06 ,  C40B50/06

CPC classification number: C12N15/10 ,  C12N15/11 ,  C12Q1/68 ,  C40B40/06 ,  C40B50/06

Abstract: 本发明公开了一种用于无创产前检测的文库构建方法及试剂盒。本发明的方法包括：在同一反应体系中，在dNTP和额外dATP存在下，利用聚合酶、多聚核苷酸激酶和不具有3’-5’外切活性的聚合酶对片段化DNA进行末端修复与加A；然后进行加接头以及纯化、PCR和环化。本发明的方法，大大缩短建库时间，提升高通量建库技术应用到无创产前检测等医学临床检测项目的实效，并且降低起始DNA在建库过程的损耗，降低PCR扩增的循环数，从而提高可用数据比率，降低数据碱基偏向性，并且能实现无需PCR的建库。可以广泛实现不同类型微量起始DNA的快速建库，并且可以应用于BGISEQ、illumina等多种测序平台。

公开(公告)号：CN107075513A

公开(公告)日：2017-08-18

申请号：CN201480081861.5

申请日：2014-09-12

Applicant: 深圳华大基因科技有限公司

Inventor： 耿春雨 ,  巴林杰丹尼斯·G. ,  张艳艳 ,  傅书锦 ,  贺玲瑜 ,  章文蔚 ,  蒋慧

IPC: C12N15/11 ,  C40B40/06 ,  C40B50/06 ,  C12Q1/68

Abstract: 提供了分离的寡核苷酸及其在核酸测序中的用途，该分离的寡核苷酸包括：第一链，所述第一链的5’末端核苷酸具有磷酸基团，并且所述第一链的3’末端核苷酸为双脱氧核苷酸；以及第二链，所述第二链的5’末端核苷酸不具有磷酸基团，并且所述第二链的3’末端核苷酸为双脱氧核苷酸，其中，所述第一链的长度大于所述第二链的长度，并且所述第一链和所述第二链之间形成双链结构。

公开(公告)号：CN107075512A

公开(公告)日：2017-08-18

申请号：CN201480081517.6

申请日：2014-10-14

Applicant: 深圳华大基因科技有限公司

Inventor： 江媛 ,  赵霞 ,  耿春雨 ,  傅书锦 ,  贺玲瑜 ,  苏小珊 ,  吴凡子 ,  李雅乔 ,  章文蔚 ,  蒋慧 ,  阿莱克谢耶夫安德烈 ,  徳马纳克拉多杰

IPC: C12N15/11 ,  C40B50/06 ,  C40B40/06 ,  C12Q1/68

Abstract: 提供了一种接头元件和使用该接头元件构建测序文库的方法，所述接头元件由接头A和接头B组成；接头A由一条核酸长链与一条核酸短链互补配对而成，长链5’端具有磷酸修饰，短链3’端为封闭修饰，短链中具有酶作用位点；接头B为一条核酸单链，其3’端能与接头A长链5’端互补配对；所述接头A的长链和接头B中具有II型限制性内切酶识别位点。使用本发明的接头元件构建测序文库时，在保证接头连接方向性的同时，解决了片段互连、接头自连、连接效率低的问题，减少了步骤间的纯化反应，缩短了连接时间，降低了成本。