可多次交换的无标记定点整合转基因系统及其应用

    公开(公告)号:CN104774870B

    公开(公告)日:2018-10-09

    申请号:CN201410016556.X

    申请日:2014-01-14

    Abstract: 提供了可多次交换的无标记定点整合转基因系统及其应用,其中该转基因系统包括:第一构建体,所述第一构建体为TALEN载体,所述TALEN载体识别并剪切友好位点序列;第二构建体,所述第二构建体包含左同源臂、右同源臂、筛选标记表达框和第一整合酶识别序列loxp和lox2272;第三构建体,所述第三构建体包含目的外源基因和第二整合酶识别序列loxp’和lox2272’;以及第四构建体,所述第四构建体包含整合酶基因Cre表达框。利用该转基因系统能够简单、快捷、高效地实现目的外源基因在动物基因组上的定点插入,且制备获得的转基因动物细胞不含任何抗性标记基因,制备周期短、安全可靠,目的外源基因能够稳定遗传到下一代。

    可多次交换的无标记定点整合转基因系统及其应用

    公开(公告)号:CN104774870A

    公开(公告)日:2015-07-15

    申请号:CN201410016556.X

    申请日:2014-01-14

    Abstract: 提供了可多次交换的无标记定点整合转基因系统及其应用,其中该转基因系统包括:第一构建体,所述第一构建体为TALEN载体,所述TALEN载体识别并剪切友好位点序列;第二构建体,所述第二构建体包含左同源臂、右同源臂、筛选标记表达框和第一整合酶识别序列loxp和lox2272;第三构建体,所述第三构建体包含目的外源基因和第二整合酶识别序列loxp’和lox2272’;以及第四构建体,所述第四构建体包含整合酶基因Cre表达框。利用该转基因系统能够简单、快捷、高效地实现目的外源基因在动物基因组上的定点插入,且制备获得的转基因动物细胞不含任何抗性标记基因,制备周期短、安全可靠,目的外源基因能够稳定遗传到下一代。

    一种用于单细胞培养的培养基及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN107841481A

    公开(公告)日:2018-03-27

    申请号:CN201610831445.3

    申请日:2016-09-19

    Abstract: 本申请公开了一种用于单细胞培养的培养基及其制备方法和应用。本申请的用于单细胞培养的培养基,包括普通培养基和添加剂,添加剂为提取自永生化细胞培养产物的永生化细胞分泌物,永生化细胞为用于单细胞培养的培养基所用于培养的单细胞物种相同的永生化细胞。本申请的培养基,添加永生化细胞分泌物,使原代细胞在低密度下,也能正常分裂增殖,解决了成纤维细胞低密度无法满足单克隆细胞挑选的问题。采用本申请的培养基,无需标记基因,避免了标记基因导致内源基因功能破坏的风险,为基因编辑细胞商业化应用奠定了基础。由于无需药物抗性筛选,减小了试剂成本,缩短了筛选时间,避免了药物对细胞损伤,利于细胞保持野生型形态和增殖分裂能力。

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