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公开(公告)号：CN105950529B
公开(公告)日：2019-09-20
申请号：CN201610474970.4
申请日：2016-06-24
申请人： 清华大学 , 东莞深圳清华大学研究院创新中心
摘要： 本发明涉及产3‑羟基丙酸的重组谷氨酸棒杆菌及其构建方法与应用，所述重组谷氨酸棒杆菌是通过在谷氨酸棒状杆菌中过表达内源的磷酸二羟基丙酮磷酸酯酶基因hdpA，并过表达甘油脱氢酶基因gldA、甘油脱水酶及其激活因子基因pduCDEGH及3‑羟基丙醛脱氢酶基因aldH构建得到的。利用该重组菌发酵生产3‑羟基丙酸，由于谷氨酸棒杆菌能够利用不同的廉价原料进行发酵，因此可进一步降低原料的成本。本发明解决了生物安全性以及菌株对酸的耐受性问题。同时发酵过程中的菌体可作为产品，用于饲料添加剂中。本方法副产物少，使终产物3‑羟基丙酸的分离过程得到简化。
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公开(公告)号：CN117384935A
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202210807627.2
申请日：2022-07-11
申请人： 东莞深圳清华大学研究院创新中心 , 清华大学
摘要： 本发明公开一种适用于谷氨酸棒杆菌的重组表达载体pEC‑Cg1554‑CALB，所述重组表达载体中外源蛋白基因包括启动子和信号肽；所述启动子的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述信号肽的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；还公开一种表达重组脂肪酶的谷氨酸棒杆菌和构建方法；以及公开一种表达重组脂肪酶的谷氨酸棒杆菌在发酵生产重组脂肪酶、催化合成生物柴油中的应用。本发明通过利用基因工程技术构建重组的谷氨酸棒杆菌，使其能够在发酵液中直接分泌脂肪酶，与现有的其他方法相比，发酵周期短，生产过程简单，达到食品安全等级，具有重要的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN105400831B
公开(公告)日：2019-02-05
申请号：CN201510890661.0
申请日：2015-12-07
申请人： 清华大学 , 东莞深圳清华大学研究院创新中心
摘要： 本发明公开了一种利用重组谷氨酸棒杆菌发酵联产1，3‑丙二醇和谷氨酸的方法，包括通过以下步骤获得重组谷氨酸棒杆菌：1)在谷氨酸棒杆菌中引入1，3‑丙二醇脱氢酶的编码基因；2)在谷氨酸棒杆菌中引入1，2‑丙二醇脱水酶及其激活因子的编码基因或者引入甘油脱水酶及其激活因子的编码基因。本发明所提供的方法采用了谷氨酸棒杆菌为生产菌株，解决了生物安全性的问题，降低了菌体处理的成本。本发明所提供的方法充分耦联谷氨酸和1，3‑丙二醇生产过程，使得还原力得到充分利用。在不降低谷氨酸得率的同时，获得极高的1，3‑丙二醇对甘油的质量转化率，而且反应的副产物少，分离过程简便。
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公开(公告)号：CN105950642A
公开(公告)日：2016-09-21
申请号：CN201610576214.2
申请日：2016-07-20
申请人： 清华大学 , 东莞深圳清华大学研究院创新中心
CPC分类号： C12N9/88 , C12P7/18 , C12P7/42 , C12Y402/0103
摘要： 本发明提供了一种对氧及甘油具有耐受性的甘油脱水酶基因及其应用，本发明的甘油脱水酶基因dhaB1B2来自百脉根根瘤菌，仅包括两个亚基，大的α亚基和小的β亚基，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑2所示。本发明的甘油脱水酶基因dhaB1B2具有很高的催化活性，且甘油及氧对其酶活的抑制作用远远低于目前已知的其他B12‑依赖型甘油脱水酶。另外，本发明的甘油脱水酶基因可以显著提高1,3‑丙二醇和3‑羟基丙酸的产量，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN105950529A
公开(公告)日：2016-09-21
申请号：CN201610474970.4
申请日：2016-06-24
申请人： 清华大学 , 东莞深圳清华大学研究院创新中心
摘要： 本发明涉及产3‑羟基丙酸的重组谷氨酸棒杆菌及其构建方法与应用，所述重组谷氨酸棒杆菌是通过在谷氨酸棒状杆菌中过表达内源的磷酸二羟基丙酮磷酸酯酶基因hdpA，并过表达甘油脱氢酶基因gldA、甘油脱水酶及其激活因子基因pduCDEGH及3‑羟基丙醛脱氢酶基因aldH构建得到的。利用该重组菌发酵生产3‑羟基丙酸，由于谷氨酸棒杆菌能够利用不同的廉价原料进行发酵，因此可进一步降低原料的成本。本发明解决了生物安全性以及菌株对酸的耐受性问题。同时发酵过程中的菌体可作为产品，用于饲料添加剂中。本方法副产物少，使终产物3‑羟基丙酸的分离过程得到简化。
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公开(公告)号：CN105400831A
公开(公告)日：2016-03-16
申请号：CN201510890661.0
申请日：2015-12-07
申请人： 清华大学 , 东莞深圳清华大学研究院创新中心
摘要： 本发明公开了一种利用重组谷氨酸棒杆菌发酵联产1，3-丙二醇和谷氨酸的方法，包括通过以下步骤获得重组谷氨酸棒杆菌：1)在谷氨酸棒杆菌中引入1，3-丙二醇脱氢酶的编码基因；2)在谷氨酸棒杆菌中引入1，2-丙二醇脱水酶及其激活因子的编码基因或者引入甘油脱水酶及其激活因子的编码基因。本发明所提供的方法采用了谷氨酸棒杆菌为生产菌株，解决了生物安全性的问题，降低了菌体处理的成本。本发明所提供的方法充分耦联谷氨酸和1，3-丙二醇生产过程，使得还原力得到充分利用。在不降低谷氨酸得率的同时，获得极高的1，3-丙二醇对甘油的质量转化率，而且反应的副产物少，分离过程简便。
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公开(公告)号：CN105441372A
公开(公告)日：2016-03-30
申请号：CN201510729258.X
申请日：2015-10-30
申请人： 清华大学 , 东莞深圳清华大学研究院创新中心
摘要： 本发明涉及重组微生物，具体公开了一种可将发酵糖直接转化为乙二醇的重组谷氨酸棒杆菌与应用。本发明通过在谷氨酸棒杆菌的基础上引入外源基因，并上调了丝氨酸合成基因，敲除了丝氨酸降解基因，得到重组谷氨酸棒杆菌。使其在具有丝氨酸高含量的基础上，通过表达外源基因，独立的完成丝氨酸-乙二醇的代谢途径。即，所述重组谷氨酸棒杆菌能够以发酵糖为碳源，直接生产乙二醇，而不需要借助其他外源酶，弥补了现有技术中的不足，为建立生物法乙二醇的工业化生产奠定基础。经本发明提供的重组谷氨酸棒杆菌发酵生产的乙二醇，实际转化率达10％以上。
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公开(公告)号：CN106190997B
公开(公告)日：2024-09-17
申请号：CN201610578975.1
申请日：2016-07-20
申请人： 清华大学
IPC分类号： C12N9/06 , C12N15/53 , C12N1/21 , C12R1/15 , C12R1/19 , C12P41/00 , C12P13/08 , C12P13/00 , A61K38/44 , A61K35/741 , A61K35/74 , A61P1/14 , A23K20/189 , A23K10/18
摘要： 本发明提供了一种NADH依赖性的二氨基庚二酸脱氢酶及其应用，本发明的二氨基庚二酸脱氢酶来源于Pseudothermotoga thermarum，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码其的基因序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的二氨基庚二酸脱氢酶催化L‑2‑氨基‑6‑酮庚二酸的氨基化具有很高的活性，其能同时利用NADH和NADPH作为辅因子，且其对NADH的利用效率要远高于NADPH，通过在谷氨酸棒杆菌或大肠杆菌中过表达本发明所提供的二氨基庚二酸脱氢酶基因可以显著的提高赖氨酸的产量，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN116042499A
公开(公告)日：2023-05-02
申请号：CN202211408332.4
申请日：2022-11-10
申请人： 清华大学
摘要： 本发明提供一种提高谷氨酸棒杆菌生产色氨酸的方法。本发明通过表达外源的磷酸转酮酶基因xfp和磷酸乙酰转移酶基因pta，实现了细胞内赤鲜糖‑4‑磷酸的有效再生，通过敲除细胞内的丙酮酸激酶基因pyk提高胞内磷酸烯醇式丙酮酸的含量，通过同时调控赤鲜糖‑4‑磷酸和磷酸烯醇式丙酮酸的含量，显著提高色氨酸的含量。
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公开(公告)号：CN112280723B
公开(公告)日：2022-08-19
申请号：CN201910665004.4
申请日：2019-07-23
申请人： 清华大学 , 广东清大智兴生物技术有限公司
摘要： 本发明提供一种联产1,3‑丙二醇和1,3‑丁二醇的重组菌及其应用。所述重组菌是将phaA、phaB、bld和yqhD基因通过质粒导入克雷伯氏菌(Klebsiella)中或通过基因工程手段整合到克雷伯氏菌染色体上而成。利用本发明提供的克雷伯氏菌工程菌，同时实现两种高附加值的二元醇(1,3‑丙二醇和1,3‑丁二醇)的生产，且两种二元醇相对于底物甘油的得率超过0.6g/g，远远大于单独生产1,3‑丙二醇或1,3‑丁二醇过程的收率。目标产物分离过程更加简化，从而极大提高整个生产过程的经济效益。
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