公开(公告)号：CN102866219A

公开(公告)日：2013-01-09

申请号：CN201210321390.3

申请日：2012-09-03

申请人： 湖南农业大学

发明人： 熊兴耀 ,  曾建国 ,  胡新喜 ,  伍慧敏 ,  曾静 ,  李美

IPC分类号： G01N30/78 ,  C07J71/00

摘要： 本发明公开了一种马铃薯中α-茄碱提取及检测的方法，其步骤包括：(1)α-茄碱提取：取新鲜马铃薯肉，用组织匀浆机粉碎成匀浆，称取样品置于瓶中，加入提取液，密封后，超声提取，将提取液过膜备用；所述的提取液为体积比=1:1的质量浓度1%甲酸-水/甲醇、体积比=1:1的质量浓度1%盐酸-水/甲醇、质量浓度0.5%甲酸-水或质量浓度0.5%盐酸-水；所述的超声提取在超声频率35kHz下提取时间为5～15min。(2)液质联用检测α-茄碱：以α-茄碱m/z[M+H]+=868.78为目标离子，用选择离子监测模式定量，将标准对照液进样检测，以浓度（X，ppb）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程，根据回归方程计算α-茄碱的含量。该方法能简单、快捷、准确地检测出马铃薯中α-茄碱。

公开(公告)号：CN105330722A

公开(公告)日：2016-02-17

申请号：CN201410402969.1

申请日：2014-08-15

申请人： 湖南唯创前沿科技有限公司 ,  湖南农业大学

发明人： 曾静 ,  赵志远 ,  其他发明人请求不公开姓名

IPC分类号： C07K7/06 ,  A01P1/00 ,  A01P3/00 ,  C12P21/02 ,  C07K1/20 ,  C07K1/18 ,  C12R1/01

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体涉及一系列非核糖体抗菌肽的制备、纯化、鉴定及应用。本发明通过对短短芽孢杆菌X23发酵条件的优化、发酵液前处理方法的选择、粗液富集和精制工艺的摸索，分离纯化出了一系列广谱抗菌肽。再通过现代分析化学技术鉴定其分别为Edeine家族同系物。Edeine家族同系物具有抗菌谱广、安全性好、环境友好等优点，可以开发成为一种新型的杀菌制剂，广泛用于植物和动物病原菌的控制，对于减少因病原菌危害具有重要意义。

公开(公告)号：CN102866219B

公开(公告)日：2015-06-03

申请号：CN201210321390.3

申请日：2012-09-03

申请人： 湖南农业大学

发明人： 熊兴耀 ,  曾建国 ,  胡新喜 ,  伍慧敏 ,  曾静 ,  李美

IPC分类号： G01N30/78 ,  C07J71/00

摘要： 本发明公开了一种马铃薯中α-茄碱提取及检测的方法，其步骤包括：(1)α-茄碱提取：取新鲜马铃薯肉，用组织匀浆机粉碎成匀浆，称取样品置于瓶中，加入提取液，密封后，超声提取，将提取液过膜备用；所述的提取液为体积比=1:1的质量浓度1%甲酸-水/甲醇、体积比=1:1的质量浓度1%盐酸-水/甲醇、质量浓度0.5%甲酸-水或质量浓度0.5%盐酸-水；所述的超声提取在超声频率35kHz下提取时间为5～15min。(2)液质联用检测α-茄碱：以α-茄碱m/z[M+H]+=868.78为目标离子，用选择离子监测模式定量，将标准对照液进样检测，以浓度（X，ppb）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程，根据回归方程计算α-茄碱的含量。该方法能简单、快捷、准确地检测出马铃薯中α-茄碱。

公开(公告)号：CN103266155A

公开(公告)日：2013-08-28

申请号：CN201310194100.8

申请日：2013-05-21

申请人： 湖南农业大学

发明人： 易有金 ,  王宇婷 ,  曾静

IPC分类号： C12P21/00 ,  C07K1/16 ,  A01N63/02 ,  A01P3/00 ,  C12R1/01

摘要： 一种高效液相色谱法分离纯化植物内生细菌菌株抗菌肽的方法，是以短短芽孢杆菌B-011为基础菌株，该菌株于2013年04月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.7466，制备该菌株的发酵滤液，加入乙腈，混匀静置，离心，上清液经蒸发并浓缩，得抗菌粗提物；再采用高效液相色谱进行二次分离，得到抗菌肽活性单峰组分。本发明菌株B-011发酵滤液中的抑菌活性物质（抗菌肽）对番茄早疫病菌的孢子萌发有抑制作用，并表现出对芽管及菌丝有致畸效果。采用本发明的高效液相色谱法分离纯化该菌株发酵滤液中抑菌活性组分并对该物质进行鉴定，有助于明确该菌株抑制番茄早疫病菌的根本原因及开发新型抗菌药物。

公开(公告)号：CN103266155B

公开(公告)日：2016-05-04

申请号：CN201310194100.8

申请日：2013-05-21

申请人： 湖南农业大学

发明人： 易有金 ,  王宇婷 ,  曾静

IPC分类号： C12P21/00 ,  C07K1/16 ,  A01N63/02 ,  A01P3/00 ,  C12R1/01

摘要： 一种高效液相色谱法分离纯化植物内生细菌菌株抗菌肽的方法，是以短短芽孢杆菌B-011为基础菌株，该菌株于2013年04月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.7466，制备该菌株的发酵滤液，加入乙腈，混匀静置，离心，上清液经蒸发并浓缩，得抗菌粗提物；再采用高效液相色谱进行二次分离，得到抗菌肽活性单峰组分。本发明菌株B-011发酵滤液中的抑菌活性物质（抗菌肽）对番茄早疫病菌的孢子萌发有抑制作用，并表现出对芽管及菌丝有致畸效果。采用本发明的高效液相色谱法分离纯化该菌株发酵滤液中抑菌活性组分并对该物质进行鉴定，有助于明确该菌株抑制番茄早疫病菌的根本原因及开发新型抗菌药物。

公开(公告)号：CN102911988A

公开(公告)日：2013-02-06

申请号：CN201210292881.X

申请日：2012-08-16

申请人： 湖南农业大学

发明人： 陈武 ,  周清明 ,  王运生 ,  肖启明 ,  黎定军 ,  曾静

IPC分类号： C12P21/02 ,  C07K7/06 ,  C07K1/16 ,  A01P1/00 ,  A01P3/00 ,  A61P31/04 ,  C12R1/01

摘要： 本发明涉及一种广谱抗菌肽的制备方法，采用桥石短芽孢杆菌进行发酵，得到发酵液后离心，取上清液过滤，得到无菌发酵液，再经过固相萃取，亲水色谱分离，X23非核糖体抗菌肽经质谱鉴定。该方法操作简单，分离效率高，分离X23非核糖体抗菌肽的活性高。