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公开(公告)号：CN110951799A
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201911340672.6
申请日：2019-12-23
申请人： 福州大学 , 福建昌生生物科技发展有限公司
摘要： 本发明提供了“一菌多酶”全细胞不对称合成(2S，3R)-对甲砜基苯丝氨酸的方法，属于生物催化和酶工程领域。通过在大肠杆菌BL21（DE3）工程菌中同时表达L-苏氨酸转醛酶（PsLTTA）、乙醇脱氢酶（ApADH）和甲酸脱氢酶（CbFDH），实现(2S，3R)-对甲砜基苯丝氨酸的不对称高效生物合成。本发明在常温常压下通过一步反应便可获得β-氨基醇类抗生素的关键手性砌块(2S，3R)-对甲砜基苯丝氨酸，同时解除了副产物乙醛对PsLTTA的抑制作用，为一种高效绿色生物合成途径。
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公开(公告)号：CN110904188A
公开(公告)日：2020-03-24
申请号：CN201911342288.X
申请日：2019-12-23
申请人： 福州大学 , 福建昌生生物科技发展有限公司
摘要： 本发明公开了一种L-苏氨酸转醛酶突变体的高通量快速筛选方法，属于生物化学和酶工程领域。本发明取乙醛及乙醇脱氢酶反应液，随即置于酶标仪中检测OD340nm随时间的变化情况，计算OD340nm下降的平均反应速率VOD340nm，以乙醛浓度为自变量x，VOD340nm为因变量y，得到回归方程y＝ax，以及乙醛标准曲线。转醛反应液、L-苏氨酸转醛酶突变体全细胞反应液，充分混匀反应结束后，离心除去细胞沉淀，取上清液和乙醇脱氢酶反应液，随即置于酶标仪中检测OD340nm随时间的变化情况，计算OD340nm下降的平均速率VOD340nm；通过VOD340nm计算得到反应液中乙醛的浓度，以乙醛浓度的高低来筛选L-苏氨酸转醛酶突变体。本发明不受反应液中的杂质干扰，灵敏度和准确性高，重复性好，操作简便，便于推广应用。
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公开(公告)号：CN117646044A
公开(公告)日：2024-03-05
申请号：CN202310823682.5
申请日：2023-07-06
申请人： 福州大学 , 福建昌生生物科技发展有限公司
IPC分类号： C12P13/00
摘要： 本发明公开多酶级联合成(1R,2R)‑4‑甲砜基苯丝氨醇的方法，以D‑丝氨酸、对甲砜基苯甲醛和D‑丙氨酸为底物，利用氨基酸氧化酶、丙酮酸脱羧酶和转氨酶为催化剂，通过多酶级联反应合成(1R,2R)‑4‑甲砜基苯丝氨醇。合成路线为：D‑丝氨酸首先被氨基酸氧化酶转化为β‑羟基丙酮酸，β‑羟基丙酮酸和对甲砜基苯甲醛在丙酮酸脱羧酶的催化下生成(R)‑1‑对甲砜基苯基‑1‑羟基‑2‑氧代‑3‑丙醇(即中间产物2a)，中间产物2a和D‑丙氨酸继续在转氨酶的催化下转化为(1R,2R)‑4‑甲砜基苯丝氨醇。本方案无需添加有机溶剂且无副产物生成，转化率高达99.9％，建立了一条新的(1R,2R)‑4‑甲砜基苯丝氨醇的高效绿色酶法合成路线。
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公开(公告)号：CN110951799B
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN201911340672.6
申请日：2019-12-23
申请人： 福州大学 , 福建昌生生物科技发展有限公司
摘要： 本发明提供了“一菌多酶”全细胞不对称合成(2S，3R)‑对甲砜基苯丝氨酸的方法，属于生物催化和酶工程领域。通过在大肠杆菌BL21（DE3）工程菌中同时表达L‑苏氨酸转醛酶（PsLTTA）、乙醇脱氢酶（ApADH）和甲酸脱氢酶（CbFDH），实现(2S，3R)‑对甲砜基苯丝氨酸的不对称高效生物合成。本发明在常温常压下通过一步反应便可获得β‑氨基醇类抗生素的关键手性砌块(2S，3R)‑对甲砜基苯丝氨酸，同时解除了副产物乙醛对PsLTTA的抑制作用，为一种高效绿色生物合成途径。
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公开(公告)号：CN110577948B
公开(公告)日：2020-12-25
申请号：CN201910838613.5
申请日：2019-09-05
申请人： 福建昌生生物科技发展有限公司
摘要： 本发明提供一种L‑苏氨酸醛缩酶，具有将对甲砜基苯甲醛和甘氨酸不对称催化合成(2S,3R)‑对甲砜基苯丝氨酸的活性，L‑苏氨酸醛缩酶选择自下组中任意一种：(1)具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的多肽；(2)具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列≥80％同源性的多肽；(3)将SEQ ID NO：1所示氨基酸序列经过1‑5个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的且保留催化活性的衍生多肽。本发明还提供L‑苏氨酸醛缩酶在对甲砜基苯丝氨酸合成中的应用，挖掘筛选到来源于Actinocorallia herbida的L‑苏氨酸醛缩酶基因，采用基因工程技术表达重组大肠杆菌来源的L‑苏氨酸醛缩酶，以对甲砜基苯甲醛和甘氨酸为原料，采用全细胞催化的方法，不对称催化合成(2S,3R)‑对甲砜基苯丝氨酸，反应条件温和、对环境友好。
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公开(公告)号：CN110540977A
公开(公告)日：2019-12-06
申请号：CN201910839203.2
申请日：2019-09-05
申请人： 福建昌生生物科技发展有限公司
摘要： 本发明提供一种L-苏氨酸转醛酶在氟苯尼考手性中间体合成中的应用，L-苏氨酸转醛酶选择自下组中任意一种：(1)具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的多肽；(2)具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列≥90％同源性的多肽，且所述多肽具有催化活性；(3)将SEQ ID NO：1所示氨基酸序列经过1-5个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且保留催化活性的衍生多肽。本发明通过基因挖掘筛选到新的L-苏氨酸转醛酶基因，采用基因工程手段表达重组大肠杆菌来源的L-苏氨酸转醛酶，以对甲砜基苯甲醛和L-苏氨酸为原料，通过全细胞催化反应合成(2S,3R)-对甲砜基苯丝氨酸，在常温常压下通过一步反应便可获得氟苯尼考关键手性合成砌块，对环境友好，为一种绿色的生物合成途径。
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公开(公告)号：CN110540977B
公开(公告)日：2020-12-15
申请号：CN201910839203.2
申请日：2019-09-05
申请人： 福建昌生生物科技发展有限公司
摘要： 本发明提供一种L‑苏氨酸转醛酶在氟苯尼考手性中间体合成中的应用，L‑苏氨酸转醛酶选择自下组中任意一种：(1)具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的多肽；(2)具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列≥90％同源性的多肽，且所述多肽具有催化活性；(3)将SEQ ID NO：1所示氨基酸序列经过1‑5个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且保留催化活性的衍生多肽。本发明通过基因挖掘筛选到新的L‑苏氨酸转醛酶基因，采用基因工程手段表达重组大肠杆菌来源的L‑苏氨酸转醛酶，以对甲砜基苯甲醛和L‑苏氨酸为原料，通过全细胞催化反应合成(2S,3R)‑对甲砜基苯丝氨酸，在常温常压下通过一步反应便可获得氟苯尼考关键手性合成砌块，对环境友好，为一种绿色的生物合成途径。
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公开(公告)号：CN110577948A
公开(公告)日：2019-12-17
申请号：CN201910838613.5
申请日：2019-09-05
申请人： 福建昌生生物科技发展有限公司
摘要： 本发明提供一种L-苏氨酸醛缩酶，具有将对甲砜基苯甲醛和甘氨酸不对称催化合成(2S,3R)-对甲砜基苯丝氨酸的活性，L-苏氨酸醛缩酶选择自下组中任意一种：(1)具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的多肽；(2)具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列≥80％同源性的多肽；(3)将SEQ ID NO：1所示氨基酸序列经过1-5个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的且保留催化活性的衍生多肽。本发明还提供L-苏氨酸醛缩酶在对甲砜基苯丝氨酸合成中的应用，挖掘筛选到来源于Actinocorallia herbida的L-苏氨酸醛缩酶基因，采用基因工程技术表达重组大肠杆菌来源的L-苏氨酸醛缩酶，以对甲砜基苯甲醛和甘氨酸为原料，采用全细胞催化的方法，不对称催化合成(2S,3R)-对甲砜基苯丝氨酸，反应条件温和、对环境友好。
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公开(公告)号：CN113528475A
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN202110831411.5
申请日：2021-07-22
申请人： 福州大学
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种羰基还原酶突变体及其在制备甾体激素‑‑睾酮中的应用。将羰基还原酶突变体PmCRm与甲酸脱氢酶BstFDH_m在大肠埃希氏菌中共表达，并以该共表达工程菌的静息细胞作为生物催化剂催化雄甾‑4‑烯‑3，17‑二酮合成睾酮。该生物催化剂具有较高的催化活性、区域选择性和立体选择性，可以在10 h以内完全转化28.8 g/L雄甾‑4‑烯‑3，17‑二酮生成目标产物睾酮，且无副产物产生，其底物投料量、转化率和时空转化率皆为国内生物法制备睾酮的最高水平，经过分离纯化，产物回收率高达95%以上，说明该生物催化剂是睾酮绿色合成的高效催化剂。
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公开(公告)号：CN115786292B
公开(公告)日：2023-09-29
申请号：CN202211028698.9
申请日：2022-08-25
申请人： 福州大学
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种3β‑羟基甾体脱氢酶SfSDR及其在制备去氢表雄酮中的应用。本发明将3β‑羟基甾体脱氢酶SfSDR与葡萄糖脱氢酶BtGDH在大肠埃希氏菌中共表达，并以共表达工程菌的静息细胞作为生物催化剂协同酯酶Z03共同催化3‑乙酰氧基‑△3,5‑雄甾二烯‑17‑酮合成去氢表雄酮。该生物催化剂具有较高的催化活性、区域选择性和立体选择性，可以在6 h以内完全转化32.8 g/L的3‑乙酰氧基‑△3,5‑雄甾二烯‑17‑酮生成目标产物去氢表雄酮，无需添加有机溶剂且无副产物产生，经过分离纯化，产物回收率高达95%以上，说明该生物催化剂是去氢表雄酮绿色合成的高效催化剂。
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