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公开(公告)号：CN102604882B
公开(公告)日：2013-05-22
申请号：CN201210102114.8
申请日：2012-03-31
申请人： 福建省麦丹生物集团有限公司
摘要： 本发明公开了生产L-苯丙氨酸的工程菌及其应用。本发明提供了将重组质粒导入大肠杆菌得到的重组菌；所述重组质粒为将pheA蛋白的编码基因、aroD蛋白的编码基因、aroE蛋白的编码基因和talA蛋白的编码基因插入出发载体的多克隆位点得到的重组质粒；所述大肠杆菌的CICC编号为10245；所述pheA蛋白如序列表的序列1所示；所述aroD蛋白如序列表的序列3所示；所述aroE蛋白如序列表的序列5所示；所述talA蛋白如序列表的序列7所示。本发明的提供的工程菌可直接发酵得到L-苯丙氨酸，发酵48小时后，发酵液中的L-苯丙氨酸含量高达75g/L，极具生产应用价值。
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公开(公告)号：CN102604879A
公开(公告)日：2012-07-25
申请号：CN201210091912.5
申请日：2012-03-31
申请人： 福建省麦丹生物集团有限公司
IPC分类号： C12N1/21 , C12P19/62 , A61K31/7048 , A61P31/04 , C12R1/01
摘要： 本发明公开了生产红霉素的工程菌及其应用。本发明保护将重组质粒导入红色糖多孢菌得到的重组菌；所述重组质粒为将ermE*启动子、eryBII蛋白的编码基因和eryF蛋白的编码基因插入出发载体的多克隆位点得到的重组质粒；所述重组质粒中由ermE*启动子启动所述eryBII蛋白的编码基因和所述eryF蛋白的编码基因的表达；所述红色糖多孢菌的ATCC编号为11635。本发明的提供的工程菌可直接发酵得到红霉素，发酵液中的红霉素效价可达8000U/ml，生产成本低，是一种具有生产应用价值的生产菌株。
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公开(公告)号：CN104561074B
公开(公告)日：2017-06-06
申请号：CN201410840584.3
申请日：2014-12-30
申请人： 福建师范大学 , 福建省麦丹生物集团有限公司
摘要： 本发明公开了一株高产L‑缬氨酸工程菌的构建及其应用。本发明提供了制备重组菌的方法，包括如下步骤：将乙酰羟酸合成酶突变体编码DNA分子、乙酰羟基酸异构还原酶编码DNA分子、支链氨基酸转氨酶编码DNA分子和二羟酸脱水酶编码DNA分子导入目的菌中，得到重组菌。本发明的实验证明了本发明利用黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)MDV‑07发酵生产L‑缬氨酸，可以大大提高L‑缬氨酸的产率，提高转化率，极具生产应用价值。
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公开(公告)号：CN104480058A
公开(公告)日：2015-04-01
申请号：CN201410841171.7
申请日：2014-12-30
申请人： 福建师范大学 , 福建省麦丹生物集团有限公司
CPC分类号： C12N9/1025 , C07K14/34 , C12N9/0006 , C12N9/1096 , C12N9/88 , C12N9/93 , C12P13/06 , C12Y203/03013 , C12Y206/01002 , C12Y403/01019
摘要： 本发明公开了一株高产L-亮氨酸工程菌及其应用。本发明提供了制备重组菌的方法，包括如下步骤：将α-异丙基苹果酸合成酶突变体编码基因导入目的菌中，得到重组菌；所述α-异丙基苹果酸合成酶突变体为将α-异丙基苹果酸合成酶第494位精氨酸突变为组氨酸、第497位甘氨酸突变为天冬氨酸和第499位亮氨酸突变为缬氨酸得到的酶。本发明的高产L-亮氨酸的工程菌，特别是谷氨酸棒杆菌Corynebacterium glutamicum MD0032具有比目前国内生产菌株更高的L-亮氨酸产酸率，具有独特的鉴定标签，是一株极具生产应用价值的L-亮氨酸的生产菌株。
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公开(公告)号：CN101717769A
公开(公告)日：2010-06-02
申请号：CN200910112929.2
申请日：2009-12-08
申请人： 福建省麦丹生物集团有限公司
摘要： 本发明一种提高L-苯丙氨酸基因工程菌产酸率的方法，将本室构建的L-苯丙氨酸基因工程菌的重组表达质粒作为一个整体进行定向突变；采用烷基化试剂EMS对表达质粒进行突变的过程中，通过EMS与质粒反应时间的长短来控制突变率以获得在相同突变条件下的最佳突变时间，然后将经EMS突变处理最佳突变时间后的表达质粒电转化宿主菌构建菌株突变库；筛选获得4株L-苯丙氨酸产量不同程度提高的优良突变菌株。本发明在实现改造利于大规模发酵、易于实现产业化的L-苯丙氨酸基因工程菌产酸菌株的同时使改造操作更为容易简单。
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公开(公告)号：CN102604879B
公开(公告)日：2013-07-10
申请号：CN201210091912.5
申请日：2012-03-31
申请人： 福建省麦丹生物集团有限公司
IPC分类号： C12N1/21 , C12P19/62 , A61K31/7048 , A61P31/04 , C12R1/01
摘要： 本发明公开了生产红霉素的工程菌及其应用。本发明保护将重组质粒导入红色糖多孢菌得到的重组菌；所述重组质粒为将ermE*启动子、eryBII蛋白的编码基因和eryF蛋白的编码基因插入出发载体的多克隆位点得到的重组质粒；所述重组质粒中由ermE*启动子启动所述eryBII蛋白的编码基因和所述eryF蛋白的编码基因的表达；所述红色糖多孢菌的ATCC编号为11635。本发明的提供的工程菌可直接发酵得到红霉素，发酵液中的红霉素效价可达8000U/ml，生产成本低，是一种具有生产应用价值的生产菌株。
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公开(公告)号：CN102604882A
公开(公告)日：2012-07-25
申请号：CN201210102114.8
申请日：2012-03-31
申请人： 福建省麦丹生物集团有限公司
摘要： 本发明公开了生产L-苯丙氨酸的工程菌及其应用。本发明提供了将重组质粒导入大肠杆菌得到的重组菌；所述重组质粒为将pheA蛋白的编码基因、aroD蛋白的编码基因、aroE蛋白的编码基因和talA蛋白的编码基因插入出发载体的多克隆位点得到的重组质粒；所述大肠杆菌的CICC编号为10245；所述pheA蛋白如序列表的序列1所示；所述aroD蛋白如序列表的序列3所示；所述aroE蛋白如序列表的序列5所示；所述talA蛋白如序列表的序列7所示。本发明的提供的工程菌可直接发酵得到L-苯丙氨酸，发酵48小时后，发酵液中的L-苯丙氨酸含量高达75g/L，极具生产应用价值。
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公开(公告)号：CN102191237A
公开(公告)日：2011-09-21
申请号：CN201110073090.3
申请日：2011-03-25
申请人： 福建省麦丹生物集团有限公司
CPC分类号： C12N15/52 , C12P13/222
摘要： 本发明涉及一种增强L-苯丙氨酸合成代谢途径的方法，采用Red系统依次对L-苯丙氨酸基因工程宿主菌中的ptsG基因、pykA基因及pykF基因进行敲除；然后将工程质粒Mdphe-2植入ptsG基因、pykA基因及pykF基因均已敲除的工程宿主菌内以构建新的L-苯丙氨酸基因工程菌；最后对该新的L-苯丙氨酸基因工程菌的遗传稳定性及产酸进行验证。本发明的优点在于：不仅能够很大程度地降低工程宿主菌对葡萄糖的摄取速率，从而可降低乙酸的积累以促进菌体的生长；而且可提高芳香族氨基酸前体物之一的PEP的获取度(降低PEP丙酮酸代谢支路的消耗)，进而增强了L-苯丙氨酸合成代谢途径，提高工程菌发酵L-苯丙氨酸的能力。
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公开(公告)号：CN102021209A
公开(公告)日：2011-04-20
申请号：CN201010534775.9
申请日：2010-11-05
申请人： 福建省麦丹生物集团有限公司
摘要： 本发明涉及一种提高L-苯丙氨酸基因工程菌产酸率的方法，采用Red系统分别对新一代工程质粒MDphe-3的csrA基因缺失型工程宿主菌中的tyrA基因及串联的trpE/trpD基因进行缺失构建；然后将新一代工程质粒MDphe-3植入csrA基因、tyrA基因及串联的trpE/trpD基因缺失的工程宿主菌内以构建新的L-苯丙氨酸基因工程菌；最后对该新的L-苯丙氨酸基因工程菌的遗传稳定性及产酸进行验证。本发明的优点在于：打断了酪氨酸与色氨酸这两条苯丙氨酸生物合成的竞争代谢支路，从而保证芳香族氨基酸的代谢流更大化的流向L-苯丙氨酸的合成，进一步提高工程菌发酵L-苯丙氨酸的能力。
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公开(公告)号：CN101818165A
公开(公告)日：2010-09-01
申请号：CN201010044847.1
申请日：2010-01-19
申请人： 福建省麦丹生物集团有限公司
摘要： 本发明提供一种利用vgb基因构建抗贫氧的高密度发酵L-Phe工程质粒的方法，其采用透明颤菌血红蛋白基因及其本身的启动子元件，融合T7强终止子序列，设计合适的酶切插入位点将其插入L-苯丙氨酸工程质粒中，与功能基因一起进行串联表达，构建携带完整vgb基因表达元件的工程质粒；所述vgb基因表达元件具有附图1所示的核苷酸序列；或者具有与附图1所示序列90％以上同源性，且编码同一功能蛋白的核苷酸序列；还或者在严密实验条件下，能与附图1所示核苷酸序列进行杂交的核苷酸序列，杂交程度在90％以上。本发明保证宿主菌在高密度发酵贫氧的环境中提高细胞的摄氧能力，较好的保证外源基因的表达，从而改善了重组宿主菌高密度发酵产L-Phe过程中的氧气供求，提高了工程宿主菌的发酵水平。
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