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公开(公告)号：CN104946750A
公开(公告)日：2015-09-30
申请号：CN201510295385.3
申请日：2015-06-01
申请人： 舟山出入境检验检疫局综合技术服务中心
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q1/686
摘要： 本发明涉及一种异尖线虫虫体过敏原PCR检测技术，根据GenBank上公布的异尖科线虫线粒体COI序列设计特异性引物，对线虫样品进行PCR特异性扩增，结果表明，扩增的目的片段大小为178bp，该PCR检测体系的特异性强，不能在与鱼体中其他非异尖科线虫及鱼肉DNA中扩增出条带；敏感性高，最低检测的DNA含量为0.36pg。该检测体系的成功构建为简单异尖线虫的检测、鉴定和流行病学调查提供了有力的技术支持。
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公开(公告)号：CN104962610A
公开(公告)日：2015-10-07
申请号：CN201510293468.9
申请日：2015-06-01
申请人： 舟山出入境检验检疫局综合技术服务中心
CPC分类号： C12Q1/6844 , C12Q2531/119
摘要： 本发明涉及一种玉米内州萎蔫病菌LAMP快速检测方法，利用GenBank公布的玉米内州萎蔫病菌16S-23S序列设计LAMP引物，建立了玉米内州萎蔫病菌LAMP检测体系，并对反应条件进行了优化。以玉米内州萎蔫病菌基因组和菌悬液梯度稀释液为模版检测LAMP体系的灵敏度，结果显示，LAMP检测体系针对基因组和菌悬液的灵敏度分别达到了50fg和3.8CFU/mL，比普通PCR灵敏度高100倍。结果表明，LAMP检测体系简单、快速、灵敏度高、特异性好，在玉米内州萎蔫病菌检测方面潜力巨大。
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公开(公告)号：CN104818339B
公开(公告)日：2017-12-08
申请号：CN201510289271.8
申请日：2015-05-29
申请人： 舟山出入境检验检疫局综合技术服务中心 , 宁波大学 , 宁波博奥生物工程有限公司
摘要： 本发明提供一种检测油菜茎基溃疡病菌的LAMP‑LFD检测方法，设计了三对LAMP引物FIP、BIP、LF、LB、F3和B3，其中FIP为5’端生物素标记引物，LF为5’端异硫氰酸荧光素FITC标记探针，配制含三对引物和样品模板的LAMP反应体系步骤，对LAMP反应体系进行扩增，然后用LFD检测，并随后进行了特异性和灵敏度评价。结果显示，应用LAMP‑LFD方法对L.maculans基因组DNA检测最低检测线为114fg/μL；特异性验证实验中，用5株相关植物病原菌，链格孢属、龙眼焦腐病菌、镰刀菌属、大豆北方茎基溃疡病菌，大豆南方茎基溃疡病菌和L.maculans作为特异性试验菌株，LAMP‑LFD法检测只对L.maculans呈阳性反应。
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公开(公告)号：CN105154535A
公开(公告)日：2015-12-16
申请号：CN201510510849.8
申请日：2015-08-19
申请人： 舟山出入境检验检疫局综合技术服务中心
CPC分类号： C12Q1/6888
摘要： 本发明公开了一种基于核糖体DNA ITS2基因检测华支睾吸虫囊蚴的PCR扩增试剂盒及扩增引物，包括PCR扩增反应液，所述PCR扩增反应液包括：Tris-HCl10mmol/L，KCl 50mmol/L，MgCl2 1.5mmol/L，dNTPs 0.8mmol/L，正向引物0.4μmol/L，反向引物0.4μmol/L，DNA模板20ng/μL，Taq酶0.075U/μL。本发明灵敏度高，特异性强，检测快速、准确，为华支睾吸虫感染的诊治和预防提供有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN105132538A
公开(公告)日：2015-12-09
申请号：CN201510511207.X
申请日：2015-08-19
申请人： 舟山出入境检验检疫局综合技术服务中心
CPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q2600/16
摘要： 本发明公开了一种检测简单异尖线虫和华支睾吸虫囊蚴的双重PCR扩增试剂盒及其扩增引物，包括PCR扩增反应液，所述PCR扩增反应液包括：Tris-HCl 10mmol/L，KCl 50mmol/L，MgCl2 1.5mmol/L，dNTPs 0.64mmol/L，简单异尖线虫正、反向扩增引物0.32μmol/L，华支睾吸虫囊蚴正、反向扩增引物0.32μmol/L，简单异尖线虫DNA模板10-24ng/μL，华支睾吸虫囊蚴DNA模板10-24ng/μL，Taq酶1U/μL。本发明不但保持了较高的特异性和敏感性，而且更加方便、快捷和经济，一次反应可检测两个基因。
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公开(公告)号：CN105132414A
公开(公告)日：2015-12-09
申请号：CN201510512094.5
申请日：2015-08-19
申请人： 舟山出入境检验检疫局综合技术服务中心
摘要： 本发明公开了一种基于线粒体COI基因检测华支睾吸虫囊蚴的PCR扩增试剂盒及扩增引物，包括PCR扩增反应液，所述PCR扩增反应液包括：Tris-HCl 10mmol/L，KCl 50mmol/L，MgCl2 1.5mmol/L，dNTPs 0.8mmol/L，正向引物0.4μmol/L，反向引物0.4μmol/L，DNA模板20ng/μL，Taq酶0.075U/μL。本发明灵敏度高，特异性强，检测快速、准确，为华支睾吸虫感染的诊治和预防提供有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN104962610B
公开(公告)日：2017-12-01
申请号：CN201510293468.9
申请日：2015-06-01
申请人： 舟山出入境检验检疫局综合技术服务中心
摘要： 本发明涉及一种玉米内州萎蔫病菌LAMP快速检测方法，利用GenBank公布的玉米内州萎蔫病菌16S‑23S序列设计LAMP引物，建立了玉米内州萎蔫病菌LAMP检测体系，并对反应条件进行了优化。以玉米内州萎蔫病菌基因组和菌悬液梯度稀释液为模版检测LAMP体系的灵敏度，结果显示，LAMP检测体系针对基因组和菌悬液的灵敏度分别达到了50fg和3.8CFU/mL，比普通PCR灵敏度高100倍。结果表明，LAMP检测体系简单、快速、灵敏度高、特异性好，在玉米内州萎蔫病菌检测方面潜力巨大。
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公开(公告)号：CN105132539A
公开(公告)日：2015-12-09
申请号：CN201510511790.4
申请日：2015-08-19
申请人： 舟山出入境检验检疫局综合技术服务中心
CPC分类号： C12Q1/6888
摘要： 本发明公开了一种基于核糖体DNA ITS1基因检测华支睾吸虫囊蚴的PCR扩增试剂盒及扩增引物，包括PCR扩增反应液，所述PCR扩增反应液包括：Tris-HCl 10mmol/L，KCl 50mmol/L，MgCl2 1.5mmol/L，dNTPs 0.8mmol/L，正向引物0.4μmol/L，反向引物0.4μmol/L，DNA模板20ng/μL，Taq酶0.075U/μL。本发明灵敏度高，特异性强，检测快速、准确，为华支睾吸虫感染的诊治和预防提供有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN104962611A
公开(公告)日：2015-10-07
申请号：CN201510295301.6
申请日：2015-06-01
申请人： 舟山出入境检验检疫局综合技术服务中心
CPC分类号： C12Q1/683 , C12Q2531/113 , C12Q2565/125
摘要： 本发明涉及一种鉴定进出口海鱼中的异尖线虫幼虫的方法，对异尖线虫单条线虫总DNA进行PCR扩增，获得其rDNA-ITS序列，测序后与基因库中DNA序列比较，并根据rDNA-ITS序列比较结果鉴定线虫的种类，最后通过酶切技术获得线虫的PCR-RFLP图谱并以此作为线虫鉴定的分子标签。本发明建立异尖线虫虫种分子生物学检测体系，以实现对其快速准确的鉴定，分析结果显示本发明方法判断准确，操作步骤简单，成本低、稳定性好。
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公开(公告)号：CN104818339A
公开(公告)日：2015-08-05
申请号：CN201510289271.8
申请日：2015-05-29
申请人： 舟山出入境检验检疫局综合技术服务中心 , 宁波大学 , 宁波博奥生物工程有限公司
CPC分类号： C12Q1/6844 , C12Q2531/119
摘要： 本发明提供一种检测油菜茎基溃疡病菌的LAMP-LFD检测方法，设计了三对LAMP引物FIP、BIP、LF、LB、F3和B3，其中FIP为5’端生物素标记引物，LF为5’端异硫氰酸荧光素FITC标记探针，配制含三对引物和样品模板的LAMP反应体系步骤，对LAMP反应体系进行扩增，然后用LFD检测，并随后进行了特异性和灵敏度评价。结果显示，应用LAMP-LFD方法对L.maculans基因组DNA检测最低检测线为114fg/μL；特异性验证实验中，用5株相关植物病原菌，链格孢属、龙眼焦腐病菌、镰刀菌属、大豆北方茎基溃疡病菌，大豆南方茎基溃疡病菌和L.maculans作为特异性试验菌株，LAMP-LFD法检测只对L.maculans呈阳性反应。
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