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公开(公告)号：CN114990068B
公开(公告)日：2023-09-22
申请号：CN202210526064.X
申请日：2022-05-16
申请人： 郑州大学第一附属医院
IPC分类号： C12N5/10 , C12N15/113 , A61K35/28 , A61K35/51 , A61P31/14 , A61P43/00 , G01N15/14 , G01N1/38 , G01N1/34
摘要： 本发明公开了一种脐带间充质干细胞外泌体的制备方法及其应用，制备方法主要包括如下步骤：（1）取冻存的P3代MSCs并复苏细胞，将细胞按照每皿1×106的密度均匀铺于10 cm细胞培养皿中，每皿加10 mL的MSCs无血清培养基；（2）待步骤（1）中细胞融合率在90%时，将合成的hsa‑miR‑3194‑3p mimics和NC转染到MSC中，48小时后，收细胞培养上清用于外泌体提取，细胞培养48 h后收上清用超速离心法提取外泌体。利用表达miR‑3194‑3p的MSC外泌体能够在不影响CAR‑T细胞效应功能的情况下抑制细胞因子的产生。
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公开(公告)号：CN113069529A
公开(公告)日：2021-07-06
申请号：CN202110408956.5
申请日：2021-04-16
申请人： 郑州大学第一附属医院
摘要： 本发明属于免疫治疗联合治疗研究领域，具体涉及GSH联合PD‑1/PD‑L1阻断剂用于促进CD8+T细胞功能的用途。具体为如下四种中的任一种：1)在制备用于促进CD8+T细胞增殖的产品中的用途；2)在制备用于抑制CD8+T细胞凋亡的产品中的用途；3)在制备用于促进CD8+T细胞能力的产品中的用途，所述功能具体为细胞分泌IFN‑γ的能力；4)在制备用于治疗与CD8+T细胞发展异常有关疾病中的用途。本发明为提高肿瘤患者体内、外抗原特异性T细胞的抗肿瘤功能提供了新思路。
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公开(公告)号：CN114990069B
公开(公告)日：2023-09-22
申请号：CN202210532292.8
申请日：2022-05-17
申请人： 郑州大学第一附属医院
IPC分类号： C12N5/10 , C12N15/867 , C12N15/12 , A61K35/17 , A61P35/00
摘要： 本发明公开了一种过表达SLC43A2的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用，该过表达SLC43A2的嵌合抗原受体T细胞慢病毒表达质粒的制备步骤如下：（1）按照中心法则，获得所述CAR的编码序列DNA；（2）以PCDH质粒为表达载体，对其进行EcoRI/Sall双酶切，然后利用T4 DNA连接酶将步骤（1）中的编码序列DNA整合重组进入PCDH质粒中；（3）将步骤（2）中的连接产物转化STABL3感受态细胞，筛选、扩大培养后进一步提取质粒，即可获得重组后的慢病毒表达质粒，它通过制备成CAR‑T细胞进行应用。本发明不仅可以杀伤CD19阳性的肿瘤细胞，还增加了CART19细胞摄取甲硫氨酸的能力，增强了其扩增能力以及杀伤功能，增加了对肿瘤细胞的清除能力。
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公开(公告)号：CN114990069A
公开(公告)日：2022-09-02
申请号：CN202210532292.8
申请日：2022-05-17
申请人： 郑州大学第一附属医院
IPC分类号： C12N5/10 , C12N15/867 , C12N15/12 , A61K35/17 , A61P35/00
摘要： 本发明公开了一种过表达SLC43A2的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用，该过表达SLC43A2的嵌合抗原受体T细胞慢病毒表达质粒的制备步骤如下：（1）按照中心法则，获得所述CAR的编码序列DNA；（2）以PCDH质粒为表达载体，对其进行EcoRI/Sall双酶切，然后利用T4 DNA连接酶将步骤（1）中的编码序列DNA整合重组进入PCDH质粒中；（3）将步骤（2）中的连接产物转化STABL3感受态细胞，筛选、扩大培养后进一步提取质粒，即可获得重组后的慢病毒表达质粒，它通过制备成CAR‑T细胞进行应用。本发明不仅可以杀伤CD19阳性的肿瘤细胞，还增加了CART19细胞摄取甲硫氨酸的能力，增强了其扩增能力以及杀伤功能，增加了对肿瘤细胞的清除能力。
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公开(公告)号：CN114990068A
公开(公告)日：2022-09-02
申请号：CN202210526064.X
申请日：2022-05-16
申请人： 郑州大学第一附属医院
IPC分类号： C12N5/10 , C12N15/113 , A61K35/28 , A61K35/51 , A61P31/14 , A61P43/00 , G01N15/14 , G01N1/38 , G01N1/34
摘要： 本发明公开了一种脐带间充质干细胞外泌体的制备方法及其应用，制备方法主要包括如下步骤：（1）取冻存的P3代MSCs并复苏细胞，将细胞按照每皿1×106的密度均匀铺于10 cm细胞培养皿中，每皿加10 mL的MSCs无血清培养基；（2）待步骤（1）中细胞融合率在90%时，将合成的hsa‑miR‑3194‑3p mimics和NC转染到MSC中，48小时后，收细胞培养上清用于外泌体提取，细胞培养48 h后收上清用超速离心法提取外泌体。利用表达miR‑3194‑3p的MSC外泌体能够在不影响CAR‑T细胞效应功能的情况下抑制细胞因子的产生。
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公开(公告)号：CN114921497A
公开(公告)日：2022-08-19
申请号：CN202210532235.X
申请日：2022-05-17
申请人： 郑州大学第一附属医院
IPC分类号： C12N15/867 , C12N5/10 , C12N15/62 , A61K39/00 , A61P35/00
摘要： 本发明公开了一种双靶向CD19/CD38嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用，该种双靶向CD19/CD38嵌合抗原受体慢病毒表达质粒的制备步骤如下：（1）按照中心法则，获得所述CAR的编码序列DNA；（2）以PCDH质粒为表达载体，对其进行EcoRI/Sall双酶切，然后利用T4 DNA连接酶将步骤（1）中的编码序列DNA整合重组进入PCDH质粒中；（3）将步骤（2）中的连接产物转化STABL3感受态细胞，筛选、扩大培养后进一步提取质粒，即可获得重组后的慢病毒表达质粒，它通过制备成CAR‑T细胞进行应用。本发明既可以靶向CD19抗原也能靶向CD38抗原，规避了CAR‑T细胞因为其中一种抗原的缺失或下调导致肿瘤细胞逃逸，CAR‑T细胞治疗无效。
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