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公开(公告)号：CN101851606B
公开(公告)日：2012-05-30
申请号：CN201010140832.5
申请日：2010-04-07
申请人： 魏红江
IPC分类号： C12N5/075
摘要： 本发明公开了一种卵丘-卵母细胞复合体刀切过滤法，属于卵丘-卵母细胞复合体采集方法。用手术刀划破卵巢上的卵泡后用TALP培养液漂洗出卵丘-卵母细胞复合体和卵泡液；用支架(1)固定五个不同孔径的卵丘-卵母细胞分离筛(2)，向孔径最大的分离筛中轻轻倒入含有卵丘-卵母细胞复合体、卵泡液和TALP培养液的混合液，摇动支架使卵母细胞分离筛上的卵丘-卵母细胞复合体能充分滤过比自身孔径大的筛网，在显微镜下挑取出卵丘-卵母细胞复合体后用卵母细胞培养液清洗两次后再放入浸有石蜡油覆盖的卵母细胞培养液液滴中培养。
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公开(公告)号：CN105238817A
公开(公告)日：2016-01-13
申请号：CN201510715885.8
申请日：2015-10-29
IPC分类号： C12N15/85 , C12N15/873 , A61D19/04 , A01K67/027
摘要： 本发明涉及一种构建过量表达Leptin基因的克隆猪的方法，属于分子生物学领域；该方法主要包括pLeptin-IRES2-EGFP1过量表达载体的构建、过量表达pLeptin-IRES2-EGFP1质粒的转染，筛选并获得过量表达Leptin基因的阳性细胞系，再利用体细胞核移植技术构建转Leptin基因的重构胚，将重构胚移植到代孕母猪体内继续发育后获得转Leptin基因的克隆仔猪，取转Leptin基因克隆猪组织做过量表达验证，后期再进行转Leptin克隆猪的病理学观察和鉴定。本发明实现了Leptin基因在猪上的过量表达，该方法操作性简单、可靠性高，具有较高的实用性，为人类研究与Leptin基因功能相关代谢疾病的分子机理提供了可靠的模型和重要的参考意义。
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公开(公告)号：CN105755047A
公开(公告)日：2016-07-13
申请号：CN201610191180.5
申请日：2016-03-30
申请人： 魏红江
IPC分类号： C12N15/877 , A01K67/027
CPC分类号： C12N15/8778 , A01K67/0273 , A01K2227/108 , A01K2267/03
摘要： 本发明涉及一种通过连续克隆获得经基因修饰的克隆猪的方法，属于动物繁殖生物学领域。本发明以已获得的基因修饰猪的组织成纤维细胞为供体，利用体细胞核移植技术把供体细胞导入到去核的猪卵母细胞内构建基因修饰猪重构胚，然后进行电融合和电激活，并在猪胚胎体外培养液中培养3h后移植到发情的代孕母猪输卵管膨大部内，待代孕母猪妊娠约114d后分娩获得批量的基因修饰猪个体。本发明可克服利用基因编辑技术获得的基因修饰个体过程中出现目的基因修饰个体效率低且目的基因修饰个体间差异大的难题，以能够高效批量地生产目的基因表达及表型稳定的基因修饰克隆猪个体。
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公开(公告)号：CN105238817B
公开(公告)日：2019-03-05
申请号：CN201510715885.8
申请日：2015-10-29
IPC分类号： C12N15/85 , C12N15/873 , A61D19/04 , A01K67/027
摘要： 本发明涉及一种构建过量表达Leptin基因的克隆猪的方法，属于分子生物学领域；该方法主要包括pLeptin‑IRES2‑EGFP1过量表达载体的构建、过量表达pLeptin‑IRES2‑EGFP1质粒的转染，筛选并获得过量表达Leptin基因的阳性细胞系，再利用体细胞核移植技术构建转Leptin基因的重构胚，将重构胚移植到代孕母猪体内继续发育后获得转Leptin基因的克隆仔猪，取转Leptin基因克隆猪组织做过量表达验证，后期再进行转Leptin克隆猪的病理学观察和鉴定。本发明实现了Leptin基因在猪上的过量表达，该方法操作性简单、可靠性高，具有较高的实用性，为人类研究与Leptin基因功能相关代谢疾病的分子机理提供了可靠的模型和重要的参考意义。
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公开(公告)号：CN101851606A
公开(公告)日：2010-10-06
申请号：CN201010140832.5
申请日：2010-04-07
申请人： 魏红江
IPC分类号： C12N5/075
摘要： 本发明公开了一种卵丘-卵母细胞复合体刀切过滤法，属于卵丘-卵母细胞复合体采集方法。用手术刀划破卵巢上的卵泡后用TALP培养液漂洗出卵丘-卵母细胞复合体和卵泡液；用支架(1)固定五个不同孔径的卵丘-卵母细胞分离筛(2)，向孔径最大的分离筛中轻轻倒入含有卵丘-卵母细胞复合体、卵泡液和TALP培养液的混合液，摇动支架使卵母细胞分离筛上的卵丘-卵母细胞复合体能充分滤过比自身孔径大的筛网，在显微镜下挑取出卵丘-卵母细胞复合体后用卵母细胞培养液清洗两次后再放入浸有石蜡油覆盖的卵母细胞培养液液滴中培养。
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