公开(公告)号：CN105238817A

公开(公告)日：2016-01-13

申请号：CN201510715885.8

申请日：2015-10-29

申请人： 魏红江 ,  李鸿辉

发明人： 魏红江 ,  李鸿辉 ,  赵红业 ,  卿玉波 ,  角德灵

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/873 ,  A61D19/04 ,  A01K67/027

摘要： 本发明涉及一种构建过量表达Leptin基因的克隆猪的方法，属于分子生物学领域；该方法主要包括pLeptin-IRES2-EGFP1过量表达载体的构建、过量表达pLeptin-IRES2-EGFP1质粒的转染，筛选并获得过量表达Leptin基因的阳性细胞系，再利用体细胞核移植技术构建转Leptin基因的重构胚，将重构胚移植到代孕母猪体内继续发育后获得转Leptin基因的克隆仔猪，取转Leptin基因克隆猪组织做过量表达验证，后期再进行转Leptin克隆猪的病理学观察和鉴定。本发明实现了Leptin基因在猪上的过量表达，该方法操作性简单、可靠性高，具有较高的实用性，为人类研究与Leptin基因功能相关代谢疾病的分子机理提供了可靠的模型和重要的参考意义。

公开(公告)号：CN105177044A

公开(公告)日：2015-12-23

申请号：CN201510717721.9

申请日：2015-10-29

申请人： 魏红江 ,  赵红业

发明人： 魏红江 ,  赵红业 ,  申友锋 ,  李鸿辉 ,  赵恒 ,  角德灵

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N5/073 ,  C12N15/873 ,  A61D19/04 ,  A01K67/027

摘要： 本发明涉及通过敲除P53基因获得淋巴瘤小型猪疾病模型的方法，属于医学动物疾病模型领域；本方法主要包括P53基因TALEN靶点的设计，P53基因敲除TALEN质粒pCAG-pP53-L和pCAG-pP53-R的组装，TALEN质粒的转染，筛选并获得P53基因敲除阳性细胞系，利用体细胞核移植技术构建重构胚，将重构胚移植到代孕母猪体内继续发育后获得敲除P53基因仔猪，通过检测克隆仔猪组织中P53基因及其下游相关基因的RNA及蛋白质表达水平来验证P53基因的功能，采用组织病理学及免疫组化法鉴定仔猪组织中的淋巴瘤；该淋巴瘤疾病模型的建立对开展人类淋巴瘤的发生、形成以及药物的研发具有重要的意义，为人类淋巴瘤疾病的研究和治疗提供了可靠的模型。

公开(公告)号：CN105177044B

公开(公告)日：2019-03-15

申请号：CN201510717721.9

申请日：2015-10-29

申请人： 魏红江 ,  赵红业

发明人： 赵红业 ,  魏红江 ,  申友锋 ,  李鸿辉 ,  赵恒 ,  角德灵

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N5/073 ,  C12N15/873 ,  A61D19/04 ,  A01K67/027

摘要： 本发明涉及通过敲除P53基因获得淋巴瘤小型猪疾病模型的方法，属于医学动物疾病模型领域；本方法主要包括P53基因TALEN靶点的设计，P53基因敲除TALEN质粒pCAG‑pP53‑L和pCAG‑pP53‑R的组装，TALEN质粒的转染，筛选并获得P53基因敲除阳性细胞系，利用体细胞核移植技术构建重构胚，将重构胚移植到代孕母猪体内继续发育后获得敲除P53基因仔猪，通过检测克隆仔猪组织中P53基因及其下游相关基因的RNA及蛋白质表达水平来验证P53基因的功能，采用组织病理学及免疫组化法鉴定仔猪组织中的淋巴瘤；该淋巴瘤疾病模型的建立对开展人类淋巴瘤的发生、形成以及药物的研发具有重要的意义，为人类淋巴瘤疾病的研究和治疗提供了可靠的模型。

公开(公告)号：CN105755047A

公开(公告)日：2016-07-13

申请号：CN201610191180.5

申请日：2016-03-30

申请人： 魏红江

发明人： 魏红江 ,  李鸿辉 ,  卿玉波 ,  赵红业 ,  角德灵

IPC分类号： C12N15/877 ,  A01K67/027

CPC分类号： C12N15/8778 ,  A01K67/0273 ,  A01K2227/108 ,  A01K2267/03

摘要： 本发明涉及一种通过连续克隆获得经基因修饰的克隆猪的方法，属于动物繁殖生物学领域。本发明以已获得的基因修饰猪的组织成纤维细胞为供体，利用体细胞核移植技术把供体细胞导入到去核的猪卵母细胞内构建基因修饰猪重构胚，然后进行电融合和电激活，并在猪胚胎体外培养液中培养3h后移植到发情的代孕母猪输卵管膨大部内，待代孕母猪妊娠约114d后分娩获得批量的基因修饰猪个体。本发明可克服利用基因编辑技术获得的基因修饰个体过程中出现目的基因修饰个体效率低且目的基因修饰个体间差异大的难题，以能够高效批量地生产目的基因表达及表型稳定的基因修饰克隆猪个体。

公开(公告)号：CN105238817B

公开(公告)日：2019-03-05

申请号：CN201510715885.8

申请日：2015-10-29

申请人： 魏红江 ,  李鸿辉

发明人： 魏红江 ,  李鸿辉 ,  赵红业 ,  卿玉波 ,  角德灵

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/873 ,  A61D19/04 ,  A01K67/027

摘要： 本发明涉及一种构建过量表达Leptin基因的克隆猪的方法，属于分子生物学领域；该方法主要包括pLeptin‑IRES2‑EGFP1过量表达载体的构建、过量表达pLeptin‑IRES2‑EGFP1质粒的转染，筛选并获得过量表达Leptin基因的阳性细胞系，再利用体细胞核移植技术构建转Leptin基因的重构胚，将重构胚移植到代孕母猪体内继续发育后获得转Leptin基因的克隆仔猪，取转Leptin基因克隆猪组织做过量表达验证，后期再进行转Leptin克隆猪的病理学观察和鉴定。本发明实现了Leptin基因在猪上的过量表达，该方法操作性简单、可靠性高，具有较高的实用性，为人类研究与Leptin基因功能相关代谢疾病的分子机理提供了可靠的模型和重要的参考意义。