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    一种新型褐藻胶裂解酶AlyB10及其应用
    3.
    发明公开
    一种新型褐藻胶裂解酶AlyB10及其应用 无效

    公开(公告)号：CN109055343A

    公开(公告)日：2018-12-21

    申请号：CN201811117210.3

    申请日：2018-09-25

    申请人： 王存良

    发明人： 王存良 ,  李尚勇

    IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12P19/00 ,  C12P19/12

    CPC分类号： C12N9/88 ,  C12P19/00 ,  C12P19/12 ,  C12Y402/02003

    摘要： 本发明涉及一种具有热恢复特性的内切型褐藻胶裂解酶及其应用。所述褐藻胶裂解酶为一种新型褐藻胶裂解酶AlyB10，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的褐藻胶裂解酶为一种人工设计的新型褐藻胶裂解酶，其N端含有一段催化区（Ser1‑Phe292），C端含有一段碳水化合物结合域（Met293‑Gly398），其氨基酸序列与现有已知功能的褐藻胶裂解酶序列相似度仅为76%。本发明所述的褐藻胶裂解酶AlyB10具有热恢复特性，在煮沸10分钟后，放置在10℃孵育30分钟，可恢复其52.5%的活性。该酶作用方式为内切，降解主产物为褐藻胶二、三糖。本发明所述的褐藻胶裂解酶性质稳定，产量大，具有一定的工业化应用潜质。

    一种新型褐藻胶裂解酶Aly08及其应用
    4.
    发明公开
    一种新型褐藻胶裂解酶Aly08及其应用 有权

    公开(公告)号：CN109022408A

    公开(公告)日：2018-12-18

    申请号：CN201811117219.4

    申请日：2018-09-25

    申请人： 青岛大学

    发明人： 李尚勇 ,  韩彦弢 ,  王亚男

    IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12P19/00 ,  C12P19/12

    CPC分类号： C12N9/88 ,  C12P19/00 ,  C12P19/12 ,  C12Y402/02003

    摘要： 本发明涉及一种具有pH稳定性和热恢复特性的内切型褐藻胶裂解酶Aly08及其应用。所述褐藻胶裂解酶Aly08氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的褐藻胶裂解酶为人工设计序列，氨基酸序列与已知功能的褐藻胶裂解酶相似度仅为78%。本发明所述的褐藻胶裂解酶最适反应温度为45℃，具有热恢复特性，在煮沸5分钟后，在冰水中孵育40分钟，可恢复78.3%的活性。最适反应pH为8.3，具有宽广的pH稳定性（5‑10.6）。该酶作用方式为内切，降解主产物为不饱和褐藻胶二、三糖。本发明所述的褐藻胶裂解酶产量大，性质新颖，具有良好的工业化应用潜质。

    一种具有冷适应特性的褐藻胶裂解酶AlgA1及其应用
    5.
    发明公开
    一种具有冷适应特性的褐藻胶裂解酶AlgA1及其应用 无效

    公开(公告)号：CN109022406A

    公开(公告)日：2018-12-18

    申请号：CN201811116616.X

    申请日：2018-09-25

    申请人： 王存良

    发明人： 王存良 ,  李尚勇

    IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12P19/00 ,  C12P19/12

    CPC分类号： C12N9/88 ,  C12P19/00 ,  C12P19/12 ,  C12Y402/02003

    摘要： 本发明涉及一种具有冷适应特性（Cold‑adapted）的褐藻胶裂解酶及其应用。所述褐藻胶裂解酶AlgA1为一种人工设计的新型褐藻胶裂解酶，其N端为褐藻胶裂解酶的保守催化功能域（Gly1‑His245），在其C端设计了一段包含有160个氨基酸的碳水化合物结合结构域区（Arg246‑Pro405），其氨基酸序列与已有的褐藻胶裂解酶序列相似度（Identity）最高为89%。本发明所述的褐藻胶裂解酶AlgA1具有冷适应特性，酶促反应可控制在低温下进行，节省能源。该酶作用方式为内切，降解主产物为不饱和褐藻胶二、三糖。本发明所述的褐藻胶裂解酶性质稳定，产量大，具有一定的工业化应用潜质。

    一种褐藻胶裂解酶固定化酶的制备方法
    7.
    发明公开
    一种褐藻胶裂解酶固定化酶的制备方法 无效

    公开(公告)号：CN109536480A

    公开(公告)日：2019-03-29

    申请号：CN201811629201.2

    申请日：2018-12-28

    申请人： 青岛海大生物集团有限公司

    发明人： 宋海妹 ,  单俊伟 ,  张术聪

    IPC分类号： C12N11/10

    CPC分类号： C12N11/10 ,  C12N9/90 ,  C12Y402/02003 ,  C12Y402/02011

    摘要： 本发明公开了一种褐藻胶裂解酶固定化酶的制备方法，采用壳聚糖、罗望子胶－戊二醛交联吸附的方法，将褐藻胶裂解酶固定于介质之上，它包括壳聚糖载体的精制、交联试剂的配制、壳聚糖、罗望子胶－戊二醛的交联、褐藻胶裂解酶的提取及固定等步骤。本发明所制备的褐藻胶裂解酶固定化酶，催化能力和对不同环境(温度、pH、贮存时间)的稳定性都有明显提高，用固定化酶处理海藻酸钠，采用离子树脂吸附降解产物，筛网过滤的方法回收固定化酶，采用超滤膜过滤的方法回收游离状态的酶，可以反复利用，提高了褐藻寡糖的得率，生产过程简单，生产成本大幅度下降，满足了褐藻寡糖产品的工业化生产要求。

    一种冷适应性褐藻胶裂解酶AlgA5及其应用
    8.
    发明公开
    一种冷适应性褐藻胶裂解酶AlgA5及其应用 无效

    公开(公告)号：CN109022405A

    公开(公告)日：2018-12-18

    申请号：CN201811116605.1

    申请日：2018-09-25

    申请人： 王存良

    发明人： 王存良 ,  李尚勇

    IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12P19/00 ,  C12P19/12

    CPC分类号： C12N9/88 ,  C12P19/00 ,  C12P19/12 ,  C12Y402/02003

    摘要： 本发明涉及一种具有冷适应特性的褐藻胶裂解酶及其应用。所述褐藻胶裂解酶为一种新型褐藻胶裂解酶AlgA5，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。在序列中设计了一段F5‑F8‑Type C结构域（Glu160‑Gly220），该结合结构域可形成一段稳定的三级结构，从而对酶的冷适应性产生影响。其氨基酸序列与已有的褐藻胶裂解酶序列相似度（Identity）最高仅为75%。本发明所述的褐藻胶裂解酶AlgA5具有冷适应特性，作用方式为内切，降解主产物为不饱和褐藻胶二、三糖。本发明所述的褐藻胶裂解酶产量大，性质稳定，具有一定的工业化应用潜质。

    一种新型冷适应性褐藻胶裂解酶AlgA7及其应用
    9.
    发明公开
    一种新型冷适应性褐藻胶裂解酶AlgA7及其应用 无效

    公开(公告)号：CN109022404A

    公开(公告)日：2018-12-18

    申请号：CN201811116604.7

    申请日：2018-09-25

    申请人： 王存良

    发明人： 王存良 ,  李尚勇

    IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12P19/00 ,  C12P19/12

    CPC分类号： C12N9/88 ,  C12P19/00 ,  C12P19/12 ,  C12Y402/02003

    摘要： 本发明涉及一种新型具有冷适应特性的褐藻胶裂解酶及其应用。所述褐藻胶裂解酶为一种人工设计的新型褐藻胶裂解酶AlgA7，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，N端含有一段碳水化合物结合域（Met1‑Pro176），C端含有一段褐藻胶裂解酶保守催化区（Ser177‑Asp526），其氨基酸序列与现有已知功能的褐藻胶裂解酶序列相似度仅为71%。本发明所述的褐藻胶裂解酶AlgA7具有冷适应特性，最适反应温度为25℃，在20℃和10℃下反应活性可达到最适温度下的81.9%和42.6%。本发明所述的褐藻胶裂解酶可将酶促反应控制在低温下进行，节省了工业化应用过程中的能量消耗，从而节省成本。