摘要:
S. ghanaensis DSM 2932 besitzt eine Resistenz gegenüber Gentamycin bis 20 µg/ml. Durch Totalverdauung der genomischen DNA mit Bgl II, Einbau der Restriktionsfragmente in ein geeignetes Plasmid und Selektion gegen Gentamycin erhält man Gentamycin-resistente Klone, die ein 7 kb-Fragment mit dem Gentamycin-Resistenzgen enthalten. Das Plasmid pPH1JI enthält ebenfalls ein Resistenzgen gegen Gentamycin, das auf einem 2,3 kb- Hin dIII- Bam HI-Fragment liegt. Diese Gene eignen sich als Marker, insbesondere für Streptomyceten-Vektoren.
摘要:
as neue Streptomyces-Plasmid pSG 2 mit einem Molekulargewicht von 9,2 Megadalton, einer Konturlänge von 4.58 µm und einer Moleküllänge von etwa 13,8 Kilobasen sowie seine Gewinnung aus einer Kultur von Streptomyces ghanaensis ATCC 14672 werden beschrieben.
摘要:
Das Streptomyceten-Plasmid pSG5 ist temperatursensitiv. Mit Hilfe des pSG5-Replikons können somit temperatursensitive Hybridplasmide hergestellt werden. Diese eignen sich zum "screening" auf DNA-Abschnitte, die zu DNA-Segmenten des Hybridplasmid homolog sind.
摘要:
Durch Selektion von Streptomyces viridochromogenes DSM 4112 gegen Phosphinothricyl-alanyl-alanin (PTT) erhält man PTT-resistente Selektanten. Aus der Gesamt-DNA dieser Selektanten erhält man durch Schneiden mit Bam HI, Klonieren eines 4,0 kb großen Fragments und Selektion auf PTT-Resistenz das DNA-Fragment, welches das Phosphinothricin (PTC)-Resistenzgen trägt. Dieses ist zur Herstellung PTC-resistenter Pflanzen, aber auch als Resistenz-Marker sowie zur selektiven N-Acetylierung der L-Form von racemischem PTC geeignet.
摘要:
Aus Streptomyces coelicolor DSM 3030 erhält man durch totale Verdauung der Gesamt-DNA, Klonierung in einen geeigneten Vektor und Transformation von Streptomyces lividans intensiv purpurrote Kolonien. Durch Reisolierung der Plasmid-DNA und Schneiden mit Bam HI erhält man Fragmente von etwa 3,4 bis 9 kb Länge, auf denen das für die Farbstoffproduktion maßgebliche Gen lokalisiert ist. Dieses eignet sich als Marker, insbesondere als Inaktivierungsmarker, in Streptomyceten.
摘要:
Mutanten lassen sich sehr einfach dadurch gewinnen, daß man aus dem zu mutierenden Stamm die gesamte DNA isoliert, diese nach Spalten in kleine Fragmente in ein temperatursensitives Plasmid mit einem weiteren Selektionsmarker integriert, die so erhaltene Hybridplasmid-Population in den Ausgangsstamm transformiert, durch Selektion auf den Marker die Transformanten selektiert, durch Erhöhung der Temperatur über den Schwellenwert des temperatursensitiven Plasmids die Hybridplasmide eliminiert und durch erneute Selektion auf den Marker die Mutanten selektiert. Da auf diese Weise das mutierte Gen markiert ist, kann dieses leicht isoliert und durch Hybridisierung aus einer Genbank des Wildtyps das nicht mutierte Gen isoliert werden.