摘要:
The invention provides for a chemical method for preparing a recombinant single copy polypeptide or a portion thereof with a modified terminal amino acid α-carbon reactive group selected from the group consisting of N-terminal α-amine, C-terminal α-carboxyl, and a combination thereof. The steps of the method involve forming the recombinant single copy polypeptide or a portion thereof so that the single copy polypeptide is protected with one or more biologically added protecting groups at the N-terminal α-amine, C-terminal α-carboxyl. The recombinant single copy polypeptide can then be reacted with up to three chemical protecting agents to selectively protect reactive side chain groups and thereby prevent side chain groups from being modified. The recombinant single copy polypeptide can be cleaved with at least one cleavage reagent specific for the biological protecting group to form an unprotected terminal amino acid α-carbon reactive group. The unprotected terminal amino acid α-carbon reactive group is modified with at least one chemical modifying agent. The side chain protected terminally modified single copy polypeptide is then deprotected at the side chain groups to form a terminally modified recombinant single copy polypeptide. The number and sequence of steps in the method can be varied to achieve selective modification at the N- and/or C-terminal amino acid of a recombinantly produced polypeptide.
摘要:
Un procédé sert à purifier des peptides et des oligonucléotides séquentiellement synthétisés par des techniques d'affinité. Des produits sélectionnés sont recouverts d'un agent de couverture du terminal N dans le cas de peptides ou d'un agent de couverture du terminal 5' dans le cas d'oligonucléotides, puis sont liés à des agents d'affinité sélectifs par rapport aux agents de couverture correspondants.
摘要:
Cette invention concerne des procédés utilisant des microbes et des organismes plus évolués pour l'expression et la purification par affinité immobilisée par ligand d'un produit peptidique. Les compositions biologiques de cette invention qui sont réalisées à l'aide de ces procédés contiennent ou bien sont destinées à exprimer une structure de purification de protéine, ayant trois segments couplés en tandem composés d'une protéine de liaison, d'un peptide d'interconnexion et d'un polypeptide à fusion variable qui incorpore le produit peptidique dans une ou plusieurs copies. Suivant le procédé de l'invention, on obtient le produit peptidique comme suit: (a) on exprime une cellule hôte ou un organisme hôte de manière régulée par le vecteur d'expression recombinant portant le gène recombinant codant pour la structure de purification de protéine; (b) on purifie la structure de purification des protéines à l'aide d'une technique de séparation par affinité immobilisée par ligand; et (c) on effectue le clivage chimique ou enzymatique de la structure de purification de protéine pour produire le produit peptidique.
摘要:
L'invention concerne un moyen de fixation d'une marque, d'un support ou d'un agent bioactif à la protéine, sur un site éloigné du site actif de ladite protéine. Plus spécifiquement, l'invention concerne un procédé de fixation d'un acide aminé, d'un dérivé d'acide aminé, d'une amine et d'un nucléophile d'alcool à la terminaison carboxyle d'une protéine. Selon un mode de réalisation, on utilise une enzyme d'exopeptidase afin de fixer un nucléophile marqué à une protéine telle qu'un anticorps. Selon d'autres modes de réalisation, l'invention concerne un procédé de fixation d'une protéine à un support d'immobilisation, ainsi qu'un procédé de fixation d'un agent bioactif à une protéine.
摘要:
The present invention is directed to microbial and higher organism methods for expression and ligand immobilized affinity purification of a product peptide. The biological compositions of the invention which are produced by these methods include or are designed to express, a protein purification construct having three tandem, coupled segments composed of a binding protein, an interconnecting peptide and a variable fused polypeptide which incorporates the product peptide in one or more copies. According to the method of the invention, the following steps will allow production of the product peptide: (a) host cell or host organism expression regulated by the recombinant expression vector carrying the recombinant gene coding for the protein purification construct; (b) purification of the protein purification construct by a ligand immobilized affinity separation technique; and (c) enzymatic or chemical cleavage of the protein purification construct to produce the product peptide.
摘要:
The method of the invention provides for the formation of a recombinant polypeptide which has been modified at the C-terminal end through the use of a transpeptidation process. The method is suitable for modifying recombinant polypeptides of any source including those which may be commercially available, those derived from recombinant single copy or multicopy polypeptide constructs, or those derived from single or multicopy recombinant fusion protein constructs. The transpeptidation reaction involves contacting an endopeptidase enzyme with a recombinant polypeptide to substitute an addition unit, of one or more amino acids, for a leaving unit, linked to a core polypeptide through a cleavage site recognized by the endopeptidase enzyme. Recombinant polypeptides derived from multicopy polypeptide constructs may be cleaved from the multicopy polypeptide at the N-terminal and C-terminal ends and simultaneously undergo substitution of the leaving unit by the desired addition unit. The invention utilizes known and newly discovered cleavage recognition sites to effectuate the desired modification products.