摘要:
A member of a specific binding pair (sbp) is identified by expressing DNA encoding a genetically diverse population of such sbp members in recombinant host cells in which the sbp members are displayed in functional form at the surface of a secreted recombinant genetic display package (rgdp) containing DNA encoding the sbp member or a polypeptide component thereof, by virtue of the sbp member or a polypeptide component thereof being expressed as a fusion with a capsid component of the rgdp. The displayed sbps may be selected by affinity with a complementary sbp member, and the DNA recovered from selected rgdps for expression of the selected sbp members. Antibody sbp members may be thus obtained, with the different chains thereof expressed, one fused to the capsid component and the other in free form for association with the fusion partner polypeptide. A phagemid may be used as an expression vector, with said capsid fusion helping to package the phagemid DNA. Using this method libraries of DNA encoding respective chains of such multimeric sbp members may be combined, thereby obtaining a much greater genetic diversity in the sbp members than could easily be obtained by conventional methods.
摘要:
Methods, recombinant host cells and kits are disclosed for the production of members of specific binding pairs (sbp), e.g. antibodies, using display on the surface of secreted replicable genetic display packages (rgdps), e.g. filamentous phage. To produce a library of great diversity recombination occurs between first and second vectors comprising nucleic acid encoding first and second polypeptide chains of sbp members respectively, thereby producing recombinant vectors each encoding both a first and a second polypeptide chain component of an sbp member. The recombination may take place in vitro or intracellularly and may be site-specific, e.g. involving use of the l^_o^_x^_P sequence and mutants thereof. Recombination may take place after prior screening or selecting for rgdps displaying sbp members which bind complementary sbp member of interest.
摘要:
On identifie un membre d'une paire à liaison spécifique (sbp) en exprimant l'ADN codant une colonie à diversité génétique de ces membres de sbp dans des cellules hôtes recombinées dans lesquelles les membres de sbp se présentent sous forme fonctionnelle à la surface d'un capside de présentation génétique de recombinaison secrété (rgdp) renfermant l'ADN codant le membre sbp ou un constituant polypeptidique de celui-ci, grâce à l'expression de ce membre de sbp ou de son constituant polypeptidique sous forme d'une fusion avec un constituant d'encapsidation du rgdp. On peut sélectionner les sbp présentées selon l'affinité avec un membre de sbp complémentaire, et récupérer l'ADN des rgdp sélectionnés pour l'expression des membres de sbp sélectionnés. On peut ainsi obtenir des membres anticorporaux de sbp dont les diverses chaînes sont exprimées, l'une étant fusionnée au constituant d'encapsidation et l'autre étant sous forme libre permettant une association au polypeptide partenaire de fusion. Un phagemide peut servir de vecteur d'expression et la fusion d'encapsidation contribue à l'encapsidation de l'ADN du phagemide. A l'aide de ce procédé, on peut associer des banques d'ADN codant des chaînes respectives de ces membres multimères de sbp, afin d'obtenir des membres de sbp ayant une plus grande diversité génétique que celle que l'on obtiendrait facilement à l'aide des procédés traditionnels.
摘要:
Méthodes et nécessaires de production de chaînons de paires de liaison spécifique (pls). Des populations de constituants caténaires polypeptidiques de chaînons pls sont combinées pour former des banques de pls représentées par des capsides de présentation génétique réplicables (cpgr) sécrétées. Au moins une des chaînes polypeptidiques est exprimée sous forme d'une fusion avec un composant d'un cpgr qui présente ainsi cette chaîne polypeptidique à la surface de la cpgr. Au moins une population de chaînes polypeptidiques est exprimée à partir d'un acide nucléique susceptible d'être encapsidé grâce à un composant d'une cpgr, à partir duquel la matière génétique des cpgr produites encode une chaîne polypeptidique. Les méthodes décrites permettent la production de banques de chaînons pls multimériques à partir d'un très grand nombre de combinaisons possibles. Dans un des modes de réalisation de l'invention, une méthode se fonde sur une "reconfiguration des chaînes" pour produire des chaînons pls de spécificité voulue pour un chaînon pls homologue. Sont également décrites des procédures de sélection.
摘要:
The invention describes a method for the identification of compounds which bind to a target component of a biochemical system or modulate the activity of the target, comprising the steps of: a) compartmentalising the compounds into microcapsules together with the target, such that only a subset of the repertoire is represented in multiple copies in anyone microcapsule; and b) identifying the compound which binds to or modulates the activity of the target. The invention enables the screening of large repertoires of molecules which can serve as leads for drug development.
摘要:
DNA constructs comprise a first exon sequence of nucleotides encoding a first peptide or polypeptide, a second exon sequence of nucleotides encoding a second peptide or polypeptide and a third sequence of nucleotides between the first and second sequences encoding a heterologous intron, for example that of Tetrahymena thermophila nuclear pre-rRNA, between RNA splice sites and a site-specific recombination sequence, such as loxP, within the intron, the exons together encoding a product peptide or polypeptide. Such constructs are of use in methods of production of peptides or polypeptides, transcription leading to splicing out of the intron enabling translation of a single chain product peptide or polypeptide. Isolated nucleic acid constructs consisting essentially of a sequence of nucleotides encoding a self-splicing intron with a site-specific recombination sequence within the intron, for use in creation of constructs for expression of peptides or polypeptides, are also provided.