公开(公告)号：EP1915446B1

公开(公告)日：2017-06-14

申请号：EP06813388.3

申请日：2006-08-11

申请人： Synthetic Genomics, Inc.

发明人： YOUNG, Lei ,  SMITH, Hamilton, O. ,  GIBSON, Daniel G.

IPC分类号： C12P19/34 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/64 ,  C12N15/66 ,  C12N15/10

CPC分类号： C12N15/902 ,  C12N9/1252 ,  C12N9/22 ,  C12N9/93 ,  C12N15/10 ,  C12N15/64 ,  C12N15/66 ,  C12P19/34 ,  C12Q1/62 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/6862 ,  C12Q2521/501 ,  C12Q2522/101 ,  C12Y207/07007 ,  C12Y301/11003 ,  C12Y605/01001

摘要： The present invention relates, e.g., to in vitro method, using isolated protein reagents, for joining two double stranded (ds) DNA molecules of interest, wherein the distal region of the first DNA molecule and the proximal region of the second DNA molecule share a region of sequence identity, comprising contacting the two DNA molecules in a reaction mixture with (a) a non-processive 5′ exonculease; (b) a single stranded DNA binding protein (SSB) which accelerates nucleic acid annealing; (c) a non strand-displacing DNA polymerase; and (d) a ligase, under conditions effective to join the two DNA molecules to form an intact double stranded DNA molecule, in which a single copy of the region of sequence identity is retained. The method allows the joining of a number of DNA fragments, in a predetermined order and orientation, without the use of restriction enzymes.

摘要翻译： 本发明涉及例如使用分离的蛋白质试剂的体外方法用于连接两个感兴趣的双链（ds）DNA分子，其中第一个DNA分子的远侧区域和第二个DNA分子的近侧区域共享 包括使两种DNA分子在反应混合物中与（a）非进行型5'外切核酸酶; （b）加速核酸退火的单链DNA结合蛋白（SSB）; （c）非链置换DNA聚合酶; 和（d）连接酶，在有效连接两个DNA分子以形成完整的双链DNA分子的条件下，其中保留了序列同一性区域的单一拷贝。 该方法允许以预定的顺序和方向连接许多DNA片段，而不使用限制性内切酶。

公开(公告)号：EP1915446A2

公开(公告)日：2008-04-30

申请号：EP06813388.3

申请日：2006-08-11

申请人： The J. Craig Venter Institute

发明人： YOUNG, Lei ,  SMITH, Hamilton, O.

IPC分类号： C12N15/09

CPC分类号： C12N15/902 ,  C12N9/1252 ,  C12N9/22 ,  C12N9/93 ,  C12N15/10 ,  C12N15/64 ,  C12N15/66 ,  C12P19/34 ,  C12Q1/62 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/6862 ,  C12Q2521/501 ,  C12Q2522/101 ,  C12Y207/07007 ,  C12Y301/11003 ,  C12Y605/01001

摘要： The present invention relates, e.g., to in vitro method, using isolated protein reagents, for joining two double stranded (ds) DNA molecules of interest, wherein the distal region of the first DNA molecule and the proximal region of the second DNA molecule share a region of sequence identity, comprising contacting the two DNA molecules in a reaction mixture with (a) a non-processive 5′ exonculease; (b) a single stranded DNA binding protein (SSB) which accelerates nucleic acid annealing; (c) a non strand-displacing DNA polymerase; and (d) a ligase, under conditions effective to join the two DNA molecules to form an intact double stranded DNA molecule, in which a single copy of the region of sequence identity is retained. The method allows the joining of a number of DNA fragments, in a predetermined order and orientation, without the use of restriction enzymes.

摘要翻译： 本发明涉及例如使用分离的蛋白质试剂连接目标的两个双链（ds）DNA分子的体外方法，其中第一DNA分子的远端区域和第二DNA分子的近端区域共享一个 包括使反应混合物中的两个DNA分子与（a）非进程性5'外切酶接触; （b）加速核酸退火的单链DNA结合蛋白（SSB）; （c）非链置换DNA聚合酶; 和（d）连接酶，在有效连接两个DNA分子以形成完整双链DNA分子的条件下，其中保留了序列同一性区域的单拷贝。 该方法允许以预定顺序和取向连接多个DNA片段，而不使用限制酶。